[發明專利]一種高水溶性豬小腸消化酶粉劑及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201810965712.5
• 申請日: 2018-08-23
• 公開（公告）號: CN109085298B
• 公開（公告）日: 2021-01-15
• 發明（設計）人: 趙峰;黨方昆;張虎;于耀;杜中原
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/00
• 分類號: G01N33/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;趙靜

1.一種豬小腸消化酶粉劑的制備方法，包括下述步驟：

1)從若干頭豬的小腸中采集腸道食糜并將其混合均勻，然后將混合后的腸道食糜進行離心1，收集上清液1；

2)對所述上清液1進行蒸發濃縮，得濃縮腸液；將所述濃縮腸液進行離心2，收集上清液2；

所述步驟2)中，所述蒸發濃縮在旋轉蒸發儀上進行，所述蒸發濃縮的條件為：在蒸餾瓶水浴溫度39～59℃、旋轉速度80～120轉/分鐘、真空度為0的條件下，蒸發15～60分鐘；當濃縮液體積減少至原體積的30～50％，停止蒸發；

所述離心2的條件為：在4～8℃、9000～11000g下離心10～15分鐘；

3)將所述上清液2轉移到置于冰水浴的容器中，并向其中加入甘露醇，攪拌溶解后，再加入乙醇溶液，攪拌均勻后靜置；然后進行離心3，收集沉淀；

所述步驟3)中，所述甘露醇的加入量為：每100ml所述上清液2中加入1.5～2g；

所述乙醇溶液為體積分數為95％-100％的乙醇溶液，使用前在-20℃冰箱保存24小時以上；

所述乙醇溶液的加入量為：每100ml所述上清液2中加入350～450ml；

所述靜置的條件為：在-10℃～-25℃靜置12h以上；

所述離心3的條件為：在4～8℃、9000～11000g下離心10～15分鐘；

4)向所述沉淀中加入去離子水，并進行攪拌和超聲溶解，然后進行離心4，收集上清液3；將所述上清液3進行冷凍干燥，即得所述豬小腸消化酶粉劑。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述步驟1)中，所述豬為15kg-125kg去勢公豬；

在采集食糜前按照如下方法處理及飼喂豬：在若干頭豬的小腸上安裝T型瘺管，術后恢復10天后，飼喂粗蛋白質含量18％以上，代謝能值3200kcal/kg以上的全價配合飼料，每天分兩次飼喂，自由采食，采集腸道食糜前不提供飲水，在飼喂后2～4小時通過腸道T型瘺管采集腸道食糜；

所述上清液1為含有淀粉酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶的小腸液；

所述離心1的條件為：4～8℃、9000～11000g下離心10～15分鐘。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于：所述豬為具有相近遺傳背景、相近胎次的去勢公豬。

4.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于：所述步驟2)中，所述蒸發濃縮的蒸發時間為30～60分鐘。

5.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于：所述步驟3)中，所述靜置的溫度為-18～-25℃。

6.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于：所述步驟3)還包括對收集的沉淀進行清洗的步驟。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于：所述清洗的方法為每次用30ml用去離子水對沉淀沖洗10～30秒，共沖洗2遍。

8.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于：所述方法步驟4)中，所述去離子水的加入量為腸道食糜進行離心后獲得上清液1體積的50～100％；

所述攪拌為磁力攪拌，時間為10～15分鐘；

所述超聲溶解的條件為：在超聲頻率為39kHz～41kHz下溶解5～10分鐘；

所述離心4的條件為：4～8℃、9000～11000g下離心10～15分鐘。

9.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于：所述步驟4)還包括在冷凍干燥之前將所述上清液3靜置的步驟；所述靜置的條件為：在-20℃靜置12h以上。

10.權利要求1-9中任一項所述的方法制備得到的豬小腸消化酶粉。

11.權利要求10所述的豬小腸消化酶粉在制備豬模擬小腸液中的應用。