[發明專利]一種具有同時降低甘油三酯和膽固醇作用的干細胞及其制備方法和用途在審
| 申請號： | 201810955908.6 | 申請日： | 2018-08-21 |
| 公開（公告）號： | CN109182379A | 公開（公告）日： | 2019-01-11 |
| 發明（設計）人： | 李程;周海波;丁秋蓉 | 申請（專利權）人： | 杭州觀梓健康科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/864 | 分類號： | C12N15/864;C12N5/10;A61K35/28;A61P9/00;A61P3/06 |
| 代理公司： | 北京英創嘉友知識產權代理事務所(普通合伙) 11447 | 代理人： | 耿超;王浩然 |
| 地址： | 310000 浙江省杭州市余杭*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 轉染 制備 干細胞 降低甘油三酯 膽固醇作用 培養物 敲除 懸液 防治心血管疾病 治療心血管疾病 單克隆細胞株 心血管疾病 單克隆化 載體包裝 有效地 基因 稀釋 發病率 篩選 | ||
1.一種具有同時降低甘油三酯和膽固醇作用的干細胞的制備方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：
S1、將敲除載體包裝到AAV病毒中，形成待轉染AAV病毒顆粒；所述敲除載體的序列如SEQ ID NO.3所示；
S2、將干細胞的懸液與所述待轉染的AAV病毒顆粒的懸液以進行4-30小時的轉染，得到轉染后的培養物；
S3、將所述轉染后的培養物極限稀釋后進行單克隆化培養，并通過PCR及測序篩選出敲除了PCSK9基因和APOC3基因的單克隆細胞株。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其中，步驟S2中，將干細胞的懸液與所述待轉染的AAV病毒顆粒的懸液以進行8-24小時的轉染，得到轉染后的培養物。
3.根據權利要求1或2所述的制備方法，其中，步驟S4中，待轉染的AAV病毒顆粒的懸液的加入量使得待轉染的AAV病毒顆粒的MOI值為104-106。
4.根據權利要求1所述的制備方法，其中，所述干細胞為間充質干細胞或誘導多能干細胞。
5.根據權利要求4所述的制備方法，其中，所述間充質干細胞為骨髓間充質干細胞、脂肪間充質干細胞、臍帶間充質干細胞、宮血間充質干細胞及牙髓間充質干細胞。
6.根據權利要求1或5所述的制備方法，其中，所述AAV病毒的血清型為AAV-8病毒、AAV-6病毒、AAV-1病毒或AAV9病毒。
7.一種干細胞，其特征在于，該干細胞為權利要求1-6中任意一項所述的制備方法制備得到的干細胞。
8.一種干細胞，其特征在于，該干細胞中的PCSK9基因和APOC3基因被定向敲除。
9.一種干細胞在制備用于治療心血管疾病的藥物中的用途，其特征在于，所述干細胞為權利要求7或8所述的干細胞。
10.根據權利要求9所述的用途，其中，所述心血管疾病包括高脂血癥、腦卒中、心肌梗死、冠心病、心絞痛和血栓中的至少一種。
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