[發明專利]一種鑒別中華鰧與日本鰧的分子標記引物及方法在審
| 申請號: | 201810927801.0 | 申請日: | 2018-08-15 |
| 公開(公告)號: | CN109182571A | 公開(公告)日: | 2019-01-11 |
| 發明(設計)人: | 高天翔;徐勝勇;陳治;楊天燕;王曉艷;蔡珊珊;郭文慧 | 申請(專利權)人: | 浙江海洋大學 |
| 主分類號: | C12Q1/6895 | 分類號: | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司: | 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213 | 代理人: | 吳秉中 |
| 地址: | 316000 浙江省*** | 國省代碼: | 浙江;33 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 鑒別 分子標記引物 擴增 測序 核苷酸序列 非特異性 鑒別結果 可重復性 擴增效率 成功性 比對 引物 表現 | ||
1.一種鑒別中華鰧與日本鰧的分子標記引物,其特征在于:所述引物序列為:
12SF:5’-GTCGGTAAAACTCGTGCCAGC-3’;
12SR:5’-CATAGTGGGGTATCTAATCCCAGTTTG-3’。
2.一種利用權利要求1所述的引物鑒別中華鰧與日本鰧的方法,其特征在于:具體步驟如下:提取中華鰧與日本鰧的DNA,以兩種魚的DNA為模板進行PCR擴增,對擴增結果進行純化、測序,比對測序結果。
3.根據權利要求2所述的一種鑒別中華鰧與日本鰧的方法,其特征在于:所述測序結果顯示中華鰧與日本鰧種內遺傳差異不大于1%。
4. 根據權利要求2所述的一種鑒別中華鰧與日本鰧的方法,其特征在于:所述中華鰧的分子標記序列為SEQ ID NO.3。
5. 根據權利要求2所述的一種鑒別中華鰧與日本鰧的方法,其特征在于:所述日本鰧的分子標記序列為SEQ ID NO.4。
6. 根據權利要求2所述的一種鑒別中華鰧與日本鰧的方法,其特征在于:所述PCR擴增的反應體系組成為:超純水17.5ul,10×buffer 2.5ul,dNTPs 2ul,rTaq 0.15ul,DNA模板1ul,Primer各1ul。
7.根據權利要求2所述的一種鑒別中華鰧與日本鰧的方法,其特征在于:所述PCR擴增程序為:94℃預變性5min,然后94℃變性45sec,50℃退火45sec,72℃延伸45sec,進行35個循環,最后72℃延伸10min,4℃保存∞。
8.含有權利要求1所述的引物的試劑盒。
9.權利要求1所述引物或權利要求8所述試劑盒在鑒別中華鰧與日本鰧中的應用。
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