[發(fā)明專利]一種副豬嗜血桿菌增殖培養(yǎng)基及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810919342.1
• 申請(qǐng)日: 2018-08-14
• 公開（公告）號(hào): CN108977392B
• 公開（公告）日: 2021-08-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 尹榮煥;黃晨;原婧;白文林;周媛媛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12R1/21
• 代理公司: 西安銘澤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 61223
• 代理人: 李振瑞

本發(fā)明屬于微生物培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種副豬嗜血桿菌增殖培養(yǎng)基及其制備方法。增殖培養(yǎng)基由以下重量份的原料制成：胰蛋白酶消化物15份、大豆粉木瓜蛋白酶消化物5份、氯化鈉0?6份、酵母提取物0?0.6份、葡萄糖0?0.6份、可溶性淀粉0?2份、復(fù)合維生素0.1份、甘氨酸0.1份、蒸餾水1000份。本發(fā)明培養(yǎng)基優(yōu)化了副豬嗜血桿菌純培養(yǎng)過程，大大縮減培養(yǎng)周期，能夠短時(shí)間內(nèi)滿足科學(xué)研究和滅活疫苗研制過程中活菌數(shù)的要求。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種副豬嗜血桿菌增殖培養(yǎng)基及其制備方法。

背景技術(shù)

嗜血桿菌屬，小到中等大小的球形、卵圓或桿狀細(xì)胞，寬度一般≤1.0μm，有時(shí)有絲狀體，明顯的多形態(tài)，革蘭氏陰性、不運(yùn)動(dòng)、兼性厭氧。幾乎所有的嗜血桿菌種都需要血的生長因子，特別是X因子(原卟啉IX或正鐵血紅素)和/或V因子(煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，也稱為輔酶I)或煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(也稱為輔酶Ⅱ)；具有呼吸和發(fā)酵代謝類型，最適生長溫度35～37℃，從D-葡萄糖和其他糖類產(chǎn)酸，少數(shù)種產(chǎn)氣，還原硝酸鹽到亞硝酸鹽或進(jìn)一步還原，氧化酶和接觸酶因種而異。嗜血桿菌屬是人和動(dòng)物黏膜上的專性寄生菌，隸屬于巴斯德菌科，該屬細(xì)菌共有17個(gè)種，其中與臨床有關(guān)的有：流感嗜血桿菌、副流感嗜血桿菌、溶血嗜血桿菌、副溶血嗜血桿菌、杜克嗜血桿菌、埃及嗜血桿菌、嗜沫嗜血桿菌、副嗜沫嗜血桿菌、遲緩嗜血桿菌、副豬嗜血桿菌等。

副豬嗜血桿菌是能引起豬致死性敗血癥的嗜血桿菌種，一直給禽類養(yǎng)殖造成重大的經(jīng)濟(jì)損失，因此，也一直是微生物領(lǐng)域眾多科研人員研究的重點(diǎn)。為對(duì)副豬嗜血桿菌擴(kuò)大培養(yǎng)，為副豬嗜血桿菌的疫苗研究提供大量副豬嗜血桿菌，本發(fā)明設(shè)計(jì)了一種副豬嗜血桿菌增殖培養(yǎng)基。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明培養(yǎng)基優(yōu)化了副豬嗜血桿菌純培養(yǎng)過程，大大縮減培養(yǎng)周期，能夠短時(shí)間內(nèi)滿足科學(xué)研究和滅活疫苗研制過程中活菌數(shù)的要求。

本發(fā)明提供了一種副豬嗜血桿菌增殖培養(yǎng)基，由以下重量份的原料制成：

胰蛋白酶消化物15份、大豆粉木瓜蛋白酶消化物5份、氯化鈉0-6份、酵母提取物0-0.6份、葡萄糖0-0.6份、可溶性淀粉0-2份、復(fù)合維生素0.1份、甘氨酸0.1份、蒸餾水1000份。

優(yōu)選的，由以下重量份的原料制成：胰蛋白酶消化物15份、大豆粉木瓜蛋白酶消化物5份、氯化鈉5份、酵母提取物0.5份、葡萄糖0.5份、可溶性淀粉1份、復(fù)合維生素0.1份、甘氨酸0.1份、蒸餾水1000份。

一種上述的副豬嗜血桿菌增殖培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟：

S1，按以下重量份稱取各組分：胰蛋白酶消化物15份、大豆粉木瓜蛋白酶消化物5份、氯化鈉0-6份、酵母提取物0-0.6份、葡萄糖0-0.6份、可溶性淀粉0-2份、復(fù)合維生素0.1份、甘氨酸0.1份、蒸餾水1000份；

其中將蒸餾水分成兩份，第一份與第二份的重量比為1:99；

S2，將S1中稱取的胰蛋白酶消化物、大豆粉木瓜蛋白酶消化物、氯化鈉、酵母提取物、葡萄糖、可溶性淀粉以及第二份蒸餾水混合，121℃、20min條件下高壓滅菌，然后放涼至50℃，得基礎(chǔ)培養(yǎng)基；

S3，將S1中稱取的復(fù)合維生素、甘氨酸以及第一份蒸餾水混合，攪勻并過孔徑為0.22μm的濾膜，收集濾液；

S4，將S3的濾液與S2的基礎(chǔ)培養(yǎng)基混勻，放涼至室溫，得副豬嗜血桿菌增殖培養(yǎng)基。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明增加維生素類和氨基酸類物質(zhì)，并取得了較好的優(yōu)化結(jié)果，增殖效果明顯，優(yōu)化了副豬嗜血桿菌純培養(yǎng)過程，大大縮減培養(yǎng)周期，能夠短時(shí)間內(nèi)滿足科學(xué)研究和滅活疫苗研制過程中活菌數(shù)的要求；優(yōu)于傳統(tǒng)商品化的TSB培養(yǎng)基，降低了成本，為副豬嗜血桿菌的研究及疫苗的研制奠定基礎(chǔ)。

附圖說明