[發明專利]一種含降解石油烴微藻的氣凝膠的制備方法

在審

• 申請號: 201810884619.1
• 申請日: 2018-08-06
• 公開（公告）號: CN109097284A
• 公開（公告）日: 2018-12-28
• 發明（設計）人: 陳慶國;鮑博;李晶晶;劉梅;穆軍
• 申請（專利權）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12N11/10;C12R1/89
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

1.一種含降解石油烴微藻的氣凝膠的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）對能降解石油烴的微藻富集培養12~20天，得藻液；

（2）對藻液進行濃縮，離心，得藻液沉淀，加水定容，搖勻得藻懸液；

（3）向藻懸液中加入無菌的甘油溶液，得接種液，保藏備用；

（4）將魔芋葡甘聚糖、甘油、卡拉膠、羥丙基甲基纖維素、瓊脂、海藻酸鈉、果膠、去離子水加入燒杯中，加熱，攪拌混合均勻后滅菌、冷卻，得魔芋葡甘聚糖氣凝膠溶液；

（5）在無菌條件下，將接種液注入魔芋葡甘聚糖氣凝膠溶液中，攪拌均勻后進行預冷凍；

（6）將經步驟（5）預冷凍過的氣凝膠溶液放入冷凍干燥機中進行冷凍干燥，得含微藻的魔芋葡甘聚糖氣凝膠。

2.根據權利要求1所述的一種含降解石油烴微藻的氣凝膠的制備方法，其特征在于：步驟（4）中，所述氣凝膠溶液中還含有重量份數為0.1~0.3份的酸氧化改性的活性炭。

3.根據權利要求2所述的一種含降解石油烴微藻的氣凝膠的制備方法，其特征在于：所述酸氧化改性的活性炭為廢舊的木棉纖維經碳化及酸氧化制成的酸氧化改性的活性炭；其制備方法為：將廢舊的木棉纖維加入去離子水中，在水熱反應釜中在170~250℃下碳化9~14h，冷卻，用去離子水洗滌，得木棉纖維活性炭，將其加入濃度為60~65wt%的濃硝酸，每1g活性炭用50~100ml濃硝酸，在100~140℃的條件下處理2~8h，冷卻、過濾，用蒸餾水清洗至濾液呈中性，干燥后研磨得酸氧化改性的活性炭。

4.根據權利要求1所述的一種含降解石油烴微藻的氣凝膠的制備方法，其特征在于：步驟（1）中，所述微藻為小球藻、斜生柵藻、中肋骨條藻、塔瑪亞歷山大藻中的至少一種；富集培養的培養基用海水煮沸10~20min，抽濾后添加營養鹽，培養基中營養鹽各組分的濃度為NH₄Cl 0.1~0.3g/L，K₂HPO₄ 0.05~0.1g/L和檸檬酸鐵0.005~0.02g/L。

5.根據權利要求1所述的一種含降解石油烴微藻的氣凝膠的制備方法，其特征在于：步驟（2）中，所述的離心操作溫度為0~4℃，離心時間為10~20min，離心機轉速為4000~6000r/min；步驟（2）中將沉淀定容至30~50ml，得濃度為7×10⁷~7.5×10⁷cell/mL的藻懸液，定容所用水為無菌水。

6.根據權利要求1所述的一種含降解石油烴微藻的氣凝膠的制備方法，其特征在于：步驟（3）中，所述甘油溶液的濃度為40~60wt%，接種液中甘油溶液的體積濃度為20~30%，保藏溫度為0~4℃。

7.根據權利要求1所述的一種含降解石油烴微藻的氣凝膠的制備方法，其特征在于：步驟（4）中，所述魔芋葡甘聚糖、甘油、卡拉膠、羥丙基甲基纖維素、瓊脂、海藻酸鈉、果膠、去離子水的重量份數為魔芋葡甘聚糖0.3~0.5份、甘油2~4份、卡拉膠0.3~0.5份、羥丙基甲基纖維素1.4~1.6份、瓊脂0.4~0.6份、海藻酸鈉0.5~0.7份、果膠0.5~0.7份、去離子水100份。

8.根據權利要求1所述的一種含降解石油烴微藻的氣凝膠的制備方法，其特征在于：步驟（4）中，所述加熱方式為水浴加熱，溫度為70~90℃；攪拌轉速為600~800rpm，攪拌時間為40~60min；滅菌方式為高壓蒸汽滅菌，溫度為110~120℃，滅菌時間為10~50min。

9.根據權利要求1所述的一種含降解石油烴微藻的氣凝膠的制備方法，其特征在于：步驟（5）中，所述接種液與魔芋葡甘聚糖氣凝膠溶液的體積比為0.1~0.3:1；預冷凍溫度為-30~-10℃，凍速率是2~4℃/h，預冷凍時間為8~16h。

10.根據權利要求1所述的一種含降解石油烴微藻的氣凝膠的制備方法，其特征在于：步驟（6）中，所述冷凍干燥的冷阱溫度為-50~-30℃，凍速率是2~4℃/h，冷凍干燥時間為12~36h。