[發明專利]聯合免疫效果早期快速評價方法中的試劑及其應用

在審

• 申請號: 201810883430.0
• 申請日: 2018-08-06
• 公開（公告）號: CN109187121A
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發明（設計）人: 施明;周春保;王福生
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三0二醫院
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N15/14
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 高倩倩;崔雙雙

1.一種改良型溶血素，其特征在于，所述溶血素包括以下組分：皂角苷、多聚甲醛、Triton X-100。

2.一種改良型溶血素，其特征在于，所述溶血素包括以下組分：5％(w/v)皂角苷，0.001％(v/v)Triton X-100，1.5％(v/v)多聚甲醛。

3.一種權利要求1或2所述的溶血素的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(1)配置多聚甲醛溶液；

(2)配置好的多聚甲醛溶液中加入Triton X-100；

(3)步驟(2)的溶液中加入皂角苷，充分溶解；

優選地，所述方法包括如下步驟：

(1)配置100ml 1.5％多聚甲醛；

(2)配置好的100ml 1.5％多聚甲醛中加入Triton X-100使Triton X-100濃度0.001％；

(3)配置好的溶液中加入0.05克皂角苷，充分溶解。

4.一種流式細胞儀檢測專用溶血方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

按照10:1體積比將稀釋的權利要求1或2所述的溶血素加入到抗凝的外周血中，迅速震蕩均勻，室溫孵育20-30min，使紅細胞完全溶解，保留白細胞，用于流式細胞儀檢測；

優選地，所述方法包括如下步驟：

(1)取外周血樣本，加入抗凝劑后室溫存放用；

(2)取抗凝外周血100μl放入流式管中；

(3)加入相應的熒光抗體并混合均勻，室溫避光孵育20-30分鐘；

(4)加入1*權利要求1或2所述的溶血素1ml并迅速震蕩均勻，室溫放置5-10分鐘。

5.根據權利要求4的方法，其特征在于，所述抗凝劑包括肝素、乙二胺四乙酸鹽、枸櫞酸鹽、或草酸鹽。

6.一種白細胞分群計數的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(1)按照權利要求4或5所述的溶血方法進行溶血；

(2)離心，去除上清液；

(3)加入細胞染色緩沖液洗滌，離心，去除上清液；

(4)用固定液固定并并置于2-8℃避光保存，于48h內進行流式細胞儀白細胞分群計數分析。

7.根據權利要求6的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(1)按照權利要求4或5所述的溶血方法進行溶血；

(2)1500r/min離心5min，去除上清液；

(3)加入1ml細胞染色緩沖液PBS洗滌，1500r/min離心5min，去除上清液；

(4)用400μl固定液固定并置于2-8℃避光保存，于48h內上機分析。

8.根據權利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述固定液是多聚甲醛。

9.權利要求1或2所述的溶血素在制備分離血液中中性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞的產品中的應用。

10.權利要求1或2所述的溶血素在制備聯合免疫效果早期快速評價的產品中的應用。