[發(fā)明專利]一種三維腫瘤球培養(yǎng)基添加劑、培養(yǎng)基以及三維腫瘤球培養(yǎng)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810868902.5
• 申請日: 2018-08-02
• 公開（公告）號: CN108998441A
• 公開（公告）日: 2018-12-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱震威
• 申請（專利權(quán)）人: 南方醫(yī)科大學(xué)深圳醫(yī)院
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09
• 代理公司: 北京律誠同業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11006
• 代理人: 黃韌敏

1.一種三維腫瘤球培養(yǎng)基添加劑，其特征在于，含有甲基纖維素和結(jié)冷膠。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基添加劑，其中，甲基纖維素和結(jié)冷膠的質(zhì)量比為10:1。

3.一種三維腫瘤球培養(yǎng)基，其成分為腫瘤細胞培養(yǎng)用培養(yǎng)基，其特征在于，還含有甲基纖維素和結(jié)冷膠。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)基，其成分為DMEM/F12+EGF 20ng/ml+FGF 20ng/ml+B272％，所述B27是以體積比1:50添加，其特征在于，還含有甲基纖維素和結(jié)冷膠。

5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的培養(yǎng)基，其中，按質(zhì)量體積比計算，含有0.3％的甲基纖維素和0.03％的結(jié)冷膠。

6.一種三維腫瘤球的培養(yǎng)方法，其包括如下步驟：

1)將腫瘤細胞消化并計數(shù)，并將消化好的腫瘤細胞按10³-10⁵cells/ml，接種到權(quán)利要求3-5任一項所述的三維腫瘤球培養(yǎng)基中，37℃，5％CO₂培養(yǎng)；

2)在腫瘤球培養(yǎng)的第3-5天，待到溶液變黃，更換培養(yǎng)基；

所述更換培養(yǎng)基操作為：

將含腫瘤球的培養(yǎng)基加至離心管，加入等體積DMEM溶液稀釋；

離心機以200g離心，離心10分鐘；

去除舊培養(yǎng)基，加入新培養(yǎng)基；

3)培養(yǎng)5-7天后，待形成直徑超過100μm的腫瘤球，加入等體積DMEM溶液，離心獲取腫瘤球。