[發明專利]一種檢測配方奶粉中脂溶性維生素含量的方法及其樣品前處理方法

在審

• 申請號: 201810865594.0
• 申請日: 2018-08-01
• 公開（公告）號: CN109030648A
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發明（設計）人: 嚴華;崔鳳云;別瑋;梁娜娜;馮鑫;張朝暉
• 申請（專利權）人: 北京出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 趙曉丹

1.一種檢測配方奶粉中脂溶性維生素含量的樣品前處理方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

稱取待測配方奶粉樣品，加入抗壞血酸，無水乙醇以及KOH溶液進行皂化；

向皂化后的溶液中加入正己烷，液液萃取后離心，收集上清液；

將上清液氮吹至干，復溶，過濾，得待測溶液。

2.根據權利要求1所述的樣品前處理方法，其特征在于，所述皂化的條件：溫度為50℃-80℃，皂化時間為5min-60min。

3.根據權利要求1所述的樣品前處理方法，其特征在于，所述KOH溶液的質量濃度為40％-80％；所述待測配方奶粉樣品與KOH溶液的質量體積比g:mL為1:(2-5)。

4.根據權利要求1所述的樣品前處理方法，其特征在于，所述待測配方奶粉樣品與無水乙醇的質量體積比g:mL為1:(10-20)。

5.根據權利要求1所述的樣品前處理方法，其特征在于，所述待測配方奶粉樣品與抗壞血酸的質量比為1:(0.1-1)。

6.根據權利要求1所述的樣品前處理方法，其特征在于，所述待測配方奶粉樣品與正己烷的質量體積比g:mL為1:(10-25)。

7.一種檢測配方奶粉中脂溶性維生素含量的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

(1)在待測配方奶粉樣品中添加維生素內標溶液，得到待處理樣品；

(2)按照權利要求1-6任一所述的樣品前處理方法對待處理樣品進行前處理，得到待測溶液；

(3)采用超高效液相色譜-三重四級桿質譜聯用技術對步驟(2)獲得的待測溶液中維生素A、維生素D₂、維生素D₃、維生素E和維生素K₁進行內標法定量檢測。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述維生素內標為維生素A-D₅、維生素D₂-D₃、維生素D₃-D₃、維生素E-D₆、維生素K₁-D₇。

9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述超高效液相色譜-三重四級桿質譜聯用的檢測條件為：

色譜柱：Acquity UPLC BEH C18柱：1.7μm,2.1x100mm；

流動相：A為0.2％甲酸水溶液，B為體積比6:4的乙腈-甲醇溶液；

流速：0.25mL/min；

柱溫：40℃；

進樣量：5μL

洗脫方式：梯度洗脫；

其中，所述梯度洗脫程序為

所述三重四級桿質譜的檢測條件為：

離子源：電噴霧離子源(ESI源)；

掃描方式：正離子掃描；

檢測方式：多反應監測(MRM)；

分辨率：單位分辨率；

電噴霧電壓：5500.0V；

霧化氣流氣：50.0L/min；

氣簾氣流速：20.0L/min；

輔助氣流速：50.0L/min；

離子源溫度：500℃。

10.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述內標法定量檢測包括：

(1)標準曲線繪制：配制維生素A、維生素D₂、維生素D₃、維生素E和維生素K₁系列濃度標準工作液及其內標標準工作液，通過超高效液相色譜-三重四級桿質譜聯用技術測定，分別以維生素A、維生素D₂、維生素D₃、維生素E和維生素K1色譜峰面積與其內標的色譜峰面積比為縱坐標，以維生素A、維生素D₂、維生素D₃、維生素E和維生素K₁的質量濃度與其內標的質量濃度比為橫坐標，作線性回歸，得到維生素A、維生素D₂、維生素D₃、維生素E和維生素K₁的標準曲線；

(2)根據標準曲線，通過測得的樣品中維生素A、維生素D₂、維生素D₃、維生素E和維生素K₁及其內標的色譜峰面積計算得到維生素A、維生素D₂、維生素D₃、維生素E和維生素K₁的含量。