[發明專利]一種食管癌預后生物標志物及其檢測方法與應用

有效

• 申請號: 201810861806.8
• 申請日: 2018-08-01
• 公開（公告）號: CN108753982B
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 徐建震;楊德印;趙星
• 申請（專利權）人: 徐建震
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 曹江;周增元

本發明涉及一種食管癌預后生物標志物及其檢測方法與應用，所述生物標志物為RNA結合蛋白TRA2A，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；DNA序列如SEQ ID NO:2所示。所述食管癌預后生物標志物的檢測方法，主要包括mRNA表達改變檢測、mRNA表達改變檢測結合基因變異的檢測兩種檢測方法。檢測的樣品包括組織器官?？捎糜谥苽涫彻馨┰\斷試劑和/或藥物。本發明的食管癌預后生物標志物對于食管腺癌和食管鱗癌兩種主要的食管癌中通用，而且本發明對食管癌預后生物標志物的檢測方便迅速，實驗過程簡單，結果明確。本發明所用試劑除了TRA2A引物外，大多為通用試劑，成本低廉。

技術領域

本發明屬于生物技術及生物醫學領域，涉及一種與食管癌預后相關的標志物及其應用。

背景技術

食管癌是常見的上消化道惡性腫瘤。我國是世界上最主要的食管癌高發國。統計數據表明食管癌發生率正在逐年快速增加。食管鱗癌在不同地區發生率差異很大，在土耳其、哈薩克斯坦、伊朗東北部，中國南部和中部這一亞洲帶，每年發生率超過了1/1000，在非洲的南部和東部地區發生率也很高。食管癌病人五年生存率僅僅只有15％-25％。其中原因之一是食管癌的預后判斷仍然處于以臨床、病理等方法為基礎，缺乏分子生物標志物。因此，尋找食管癌預后生物標志物對患者進行預后判斷，從而提高患者術后生活質量，并相應地選擇合理的后續治療方案，提高生存率，是腫瘤科學領域亟待解決的研究任務。

近年來也出現了一些基于分子標志物的新型食管癌預后方法和技術，如：中國專利申請201510947274.6“檢測食管癌的生物標志物”；發現凝血酶敏感蛋白1(TSP1)可單獨作為生物標志物用于在血清或組織中診斷食管鱗癌或預測食管鱗癌的預后，包括：免疫組織化學或檢測酶聯免疫吸附法檢測了食管鱗癌患者和健康對照樣本中TSP1蛋白的表達情況。再如中國專利申請201711192088“一種食管癌的生物標志物及其應用”公開了一種在食管癌病人中檢測腫瘤相關標志物的方法，包括：制備食管癌組織和正常組織進行組織微陣列檢測，用特異性抗體和免疫組織化學法分析中胚葉特異性轉錄子(Mesoderm-specifictranscript，MEST)的表達蛋白，分析正常和腫瘤組織的差異，最終實現預后評價的目的。但上述方法的缺點是由于該方法涉及特異性抗體的制備、分離純化以及免疫組織化學方法，檢測過程耗時費力，檢測成本很高，影響了在臨床應用中的效果。這種缺陷的根本原因在于未能從基因水平上進行預后預測。

隨著基因組技術的發展，可以通過二代測序等手段研究食管癌的基因組變異信息，為食管癌的預后提供新型的生物標志物。RNA結合蛋白TRA2A(transformer 2alphahomolog)是一種在果蠅性別決定中起重要作用的剪切調控子，它由一個RNA識別基序和位于基序兩側的兩個精氨酸/絲氨酸結構域組成。位于人類7號染色體上。

發明內容

本發明的目的在于提供新型食管癌預后標志物及其檢測方法，以解決現有方法的檢測過程耗時費力檢測成本高臨床應用效果差等問題。

為解決上述問題，本發明提供了一種食管癌預后生物標志物，所述生物標志物為RNA結合蛋白TRA2A。

進一步的，所述生物標志物氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述生物標志物DNA序列如SEQ ID NO:2所示。

一種上述食管癌預后生物標志物的檢測方法，主要包括mRNA表達改變檢測、mRNA表達改變檢測結合基因變異的檢測兩種檢測方法。

進一步的，所述基因變異的檢測包括基因拷貝數增加、刪失。

進一步的，所述樣品包括組織器官。

mRNA表達改變檢測，主要包括以下步驟：

(1)收集器官組織樣本，放在研缽中并加入液氮研磨至粉末狀；

(2)Trizol試劑法提取組織RNA；

(3)將步驟(2)總RNA逆轉錄成cDNA；