[發明專利]一種酶活提高的雙果糖酐水解酶突變體C387A

有效

• 申請號: 201810834320.5
• 申請日: 2018-07-26
• 公開（公告）號: CN108949723B
• 公開（公告）日: 2020-08-04
• 發明（設計）人: 沐萬孟;江波;郁書懷;張濤;朱鶯鶯;程園園
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24;C12N15/56;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/12
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

1.一種雙果糖酐水解酶(AcDFA-IIIase)突變體C387A，其特征在于，氨基酸序列如SEQID NO.4所示。

2.編碼權利要求1所述突變體的基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.攜帶權利要求2所述基因的載體、細胞或質粒。

4.一種獲得權利要求1所述突變體C387A的方法，其特征在于，根據SEQ ID NO.1所示的基因序列，設計定點突變引物，對基因進行定點突變，獲得編碼突變體C387A的基因，并在大腸桿菌中進行表達。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，以大腸桿菌(Escherichia coli)BL21(DE3)為表達宿主。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法具體是:(1)以SEQ ID NO.1所示核苷酸序列為模板，以序列如SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示的引物，進行PCR，即得到編碼的387位氨基酸由半胱氨酸突變成丙氨酸的C387A突變體基因序列；(2)將上一步得到的重組基因序列，連接到pET-22a表達載體中，得到重組質粒pET-22b(+)-C387A，將重組質粒轉化到大腸桿菌BL21，挑選陽性單克隆進行發酵培養。

7.一種重組大腸桿菌，其特征在于，以大腸桿菌(Escherichia coli)BL21(DE3)為表達宿主，以pET-22b(+)為載體，表達權利要求1所述的雙果糖酐水解酶突變體C387A。

8.權利要求1所述雙果糖酐水解酶突變體C387A在菊二糖合成工業中的應用。

9.權利要求7所述的重組大腸桿菌在菊二糖合成工業中的應用。