[發明專利]精子端粒長度的檢測試劑、試劑盒及應用與檢測方法

在審

• 申請號: 201810831973.8
• 申請日: 2018-07-26
• 公開（公告）號: CN108913754A
• 公開（公告）日: 2018-11-30
• 發明（設計）人: 李丹;江南
• 申請（專利權）人: 蘇州呼呼健康科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6816
• 分類號: C12Q1/6816
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 許洪潔

本發明提供了精子端粒長度的檢測試劑、試劑盒及檢測方法，屬于生物醫學檢驗領域。本發明提供的精子端粒長度的檢測試劑，能方便實際檢測，且檢測結果更可靠穩定；將精子端粒長度的檢測試劑應用到精子端粒長度檢測中和制備檢測試劑盒中，都能方便得到準確可靠的結果，而檢測試劑盒更加方便進行檢測，檢測方法操作簡單，結果易于判定，易于臨床推廣使用，實用性較強。

技術領域

本發明涉及生物醫學檢驗領域，具體而言，涉及精子端粒長度的檢測試劑、試劑盒及應用與檢測方法。

背景技術

研究發現，端粒的長度依靠端粒酶來維持，端粒酶在生殖細胞中高度表達，這可能是隨著年齡的增加端粒在精子細胞中的長度長于體細胞的原因(人體細胞中端粒約5-10kb，而生殖細胞中端粒約10-20kb)，端粒酶活性降低和端粒長度縮短會導致細胞凋亡以。

目前臨床研究端粒長度常采用方法包括末端限制性片段、單個端粒長度分析、雜交保護分析法、熒光原位雜交、寡核苷酸引物原位DNA合成法、定量PCR等，這些方法對操作者技術和統計分析要求較高，并且檢測時間長、不適用于大批量操作。

發明內容

本發明的第一目的在于提供精子端粒長度的檢測試劑，通過檢測試劑能很好的檢測精子端粒的長度。

本發明的第二目的在于提供上述精子端粒長度的檢測試劑在端粒長度檢測中的應用。

本發明的第三目的在于提供精子端粒長度的檢測試劑在制備精子端粒長度的檢測試劑盒中的應用。

本發明的第四目的在于提供精子端粒長度的檢測試劑盒，通過該檢測試劑盒，能更方便的對精子端粒長度進行檢測。

本發明的第五目的在于提供精子端粒長度的檢測方法，通過本檢測方法，能快速準確的檢測精子的端粒長度。

為了實現本發明的上述目的，采用以下技術方案：

精子端粒長度的檢測試劑，檢測試劑主要包括對照微球和熒光標記探針；對照微球含有1×10³-1×10⁷個/mL的有探針標記的微球，探針為(TTAGGG)n，n＝100～10000；微球的直徑為4-10μm；熒光標記探針為FITC-(CCCTAA)n，n＝2～7；熒光標記探針的含量為1-10μg/mL。

上述的精子端粒長度的檢測試劑在端粒長度檢測中的應用。

上述的精子端粒長度的檢測試劑在制備精子端粒長度的檢測試劑盒中的應用。

精子端粒長度的檢測試劑盒，檢測試劑盒包括對照微球和熒光標記探針；對照微球含有1×10³-1×10⁷個/mL的有探針標記的微球，探針為(TTAGGG)n，n＝100～10000；微球的直徑為4-10μm；熒光標記探針為FITC-(CCCTAA)n，n＝2～7；熒光標記探針的含量為1-10μg/mL；還包括雜交緩沖液、洗滌緩沖液和DNA染色液；雜交緩沖液由50-80％甲酰胺，20mmol/L Tris-HCl，0.1-1％BSA制成，雜交緩沖液的pH值6.5-7.8；洗滌緩沖液由50-80％甲酰胺，20mmol/L Tris-HCl，0.1-1％BSA、0.01-0.1％Tween-20制成，洗滌緩沖液為pH值6.5-7.8；DNA染色液由0.05-0.19mol/L NaCl，2.3-7.8mmol/L KCl，2.4-5.6mmol/L Na₂HPO₄，0.5-2.0mmol/L KH₂PO₄、0.01-0.1％BSA、0.02-0.15μg/mL的碘化丙啶制成。

精子端粒長度的檢測方法，包括以下步驟：