[發明專利]SERPINE1基因及其shRNA序列及在抗人肺癌中的應用

在審

• 申請號: 201810830316.1
• 申請日: 2018-07-26
• 公開（公告）號: CN108929871A
• 公開（公告）日: 2018-12-04
• 發明（設計）人: 束永前;劉捷;帥優;劉春燕
• 申請（專利權）人: 江蘇省人民醫院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K31/7105;A61K31/711;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 杜靜;徐冬濤

本發明公開一種用于抑制抗人肺癌的基因SERPINE1及其shRNA，所述shRNA包括(1)第一對干擾序列(SEQ ID NO:2/SEQ ID NO:3)或(2)第二對干擾序列(SEQ ID NO:4/SEQ ID NO:5)。本發明設計的特異性shRNA序列可以有效靶向抑制SERPINE1基因的表達，為未來肺癌基因治療提供高效和便捷的手段。

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，具體涉及SERPINE1基因及其shRNA序列及在抗人肺癌中的應用。

背景技術

絲氨酸蛋白酶抑制劑亞家族E成員1(serpin family E member 1,SERPINE1)基因位于染色體7q22.1，它屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族。SERPINE1基因編碼的絲氨酸蛋白酶抑制劑在組織纖溶酶原激活物(tissue plasminogen activator,tPA)和尿激酶(urokinase plasminogen activator,uPA)的中起著重要的抑制作用。

SERPINE1基因與人類多種代謝性疾病有著密切相關性，有報道顯示SERPINE1基因與肥胖癥和代謝綜合征相關，其轉錄調控區的DNA甲基化水平在能量限制下與患有代謝綜合征肥胖受試者的代謝相關^[1]。此外還有研究表明，纖溶酶原激活物抑制劑-1(PAI-1)是已知被證明衰老相關組分關鍵因素，其編碼基因SERPINE1的無義突變可以防止人體內生物衰老，無義突變的SERPINE1等位基因攜帶者具有更長的壽命，其機制可能與代謝的異常改變所導致^[2]。

SERPINE1基因編碼的絲氨酸蛋白酶抑制劑具有增加纖溶酶的表達功能從而引起基質的重塑，這在惡性腫瘤的發生發展中起著重要的作用，有研究證實，SERPINE1基因編碼的絲氨酸蛋白酶抑制劑蛋白是包括胃癌、頭頸部腫瘤和胰腺癌等多種癌癥預后不良的重要生物標志物。例如，Miguel等研究者表明過表達SERPINE1基因編碼蛋白通過參與細胞外基質重塑(extracellular matrix,ECM)誘導上皮-間質轉化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)過程，進而增加頭頸部鱗狀癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力^[3]。Botla等研究者發現在胰腺導管腺癌中靶基因SERPINE1基因上游受到miR-192調控，miR-192在胰腺導管腺癌中處于低表達狀態并參與EMT進程，miR-192的過表達可以減少胰腺導管腺癌細胞增殖和細胞活性并誘導細胞凋亡，miR-192的過度表達可以抑制胰腺導管腺癌細胞侵襲能力，同樣在裸鼠體內也驗證了同樣的結果，miR-192低水平導致的SERPINE1基因編碼的PAI-1蛋白上調以及引起的EMT現象可以誘導胰腺導管腺癌細胞遷移并引起胰腺導管腺癌細胞侵襲表型^[4]。Zhu等研究者發現在胃癌中，miR-30b處于低表達水平并且可以靶向SERPINE1基因編碼的PAI-1蛋白，過表達miR-30b促進胃癌細胞凋亡和抑制胃癌細胞的增殖，且在裸鼠體內miR-30b抑制胃癌細胞致瘤性并促進胃癌細胞在體內的凋亡，通過多種胃癌細胞系和胃癌人組織樣品的結果顯示miR-30b與PAI-1蛋白處于負表達關系^[5]。

肺癌是在全球惡性腫瘤惡性腫瘤的主要種類之一，近20年來，肺癌不僅發病率高，且隨著環境污染和生活節奏加快，我國肺癌呈快速增長的趨勢^[6]。根據國家癌癥中心發布的最新版的2018年中國惡性腫瘤報告，我國肺癌在男性惡性腫瘤發病率高居首位，同時也是女性惡性腫瘤中發病率僅次于乳腺癌的主要腫瘤，因此，尋找肺癌治療的有效靶點成為目前提高城鄉居民健康的主要任務。