[發明專利]一種表達蛋白質或多肽的方法及其專用表達盒

有效

• 申請號: 201710015228.1
• 申請日: 2017-01-10
• 公開（公告）號: CN106636190B
• 公開（公告）日: 2020-05-05
• 發明（設計）人: 劉昱輝;譚杰;李梅;賈士榮;王志興
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/62;A01H5/10;C07K14/585;C12P21/06;C07K14/145
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;何葉喧

1.表達盒Ⅰ；所述表達盒Ⅰ自上游至下游依次包括如下元件：植物油體蛋白基因的啟動子、融合基因Ⅰ和終止序列；

所述融合基因Ⅰ中含有區段甲和區段乙；所述區段甲編碼植物油體蛋白；所述區段乙編碼目的物的前體；所述目的物為蛋白質或多肽；

所述植物油體蛋白基因的啟動子的核苷酸序列如序列表中序列4自5′末端起第1至875位所示；

所述目的物的前體為鮭魚降鈣素的前體；鮭魚降鈣素的前體的核苷酸序列如序列表中序列1自5′末端起第22至120位所示；

所述終止序列為Nos polyA終止子；所述Nos polyA終止子的核苷酸序列如序列表中序列4自5′末端起第1474至1721位所示。

2.如權利要求1所述表達盒Ⅰ，其特征在于：所述融合基因Ⅰ自上游至下游依次包括如下區段：第一個區段丙、所述區段甲、第二個區段丙和所述區段乙；所述第一個區段丙編碼6×His標簽；所述第二個區段丙編碼8×His標簽。

3.含有權利要求1或2所述表達盒Ⅰ的重組載體Ⅰ。

4.一種制備目的物的方法，依次包括如下步驟：

（1）將權利要求3所述重組載體Ⅰ導入受體植物，得到轉基因植物；

（2）取轉基因植物的種子，提取油體；

（3）利用蛋白標簽從所述油體中純化所述融合蛋白；

（4）取步驟（3）得到的融合蛋白，用蛋白酶進行酶切；所述蛋白酶為腸激酶；

（5）從步驟（4）的酶切產物中分離目的物；

（6）醋酸化；

（7）脫鹽；

所述目的物為鮭魚降鈣素；

所述蛋白標簽為6×His標簽。