[發(fā)明專利]使用離子交換膜層析改進下游蛋白質(zhì)純化步驟的方法

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• 申請日: 2012-12-18
• 公開（公告）號: CN108892706A
• 公開（公告）日: 2018-11-27
• 發(fā)明（設計）人: J·J·小比爾;A·M·布朗;C·J·多德;B·E·塞耶
• 申請（專利權(quán)）人: 弗·哈夫曼-拉羅切有限公司
• 主分類號: C07K1/18
• 分類號: C07K1/18;C07K1/16
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 張莉;黃革生

1.提高用于純化蛋白質(zhì)的下游層析步驟的效率的方法，其包括：

a.在包含緩沖液的操作條件下，使包含目的多肽和多種污染物的組合物通過離子交換膜，其中所述多肽和膜具有相反的電荷，所述緩沖液具有足以與所述多肽的pI區(qū)分開來以增加所述多肽的電荷的pH和有效防止緩沖液離子屏蔽電荷的低離子強度，所述操作條件導致所述膜與所述多肽以及至少一種污染物結(jié)合；

b.過載所述離子交換膜，以使所述至少一種污染物仍與膜結(jié)合，而所述目的多肽主要在流出物中；

c.從所述離子交換膜收集包含所述目的多肽的流出物；

d.使包含所述目的多肽的膜流出物進行與前述膜帶相似電荷的離子交換層析步驟，和

e.從帶電荷的離子交換層析步驟的流出物中回收純化的多肽。

2.權(quán)利要求1的方法，其中所述離子交換膜具有0.1至100μm的孔徑。

3.權(quán)利要求1的方法，其中用單塊過濾器或厚度過濾器替換所述離子交換膜。

4.提高用于蛋白質(zhì)純化的下游層析步驟的效率的方法，其包括：

(a)在包含緩沖液的操作條件下，使包含目的多肽和多種污染物的組合物通過陽離子交換膜，其中所述多肽和膜具有相反的電荷，所述緩沖液具有低于所述多肽pI約1至約5個pH單位的pH和≤約40mS/cm的電導率，所述操作條件導致所述膜與所述多肽以及至少一種污染物結(jié)合；

b.過載所述陽離子交換膜，以使所述至少一種污染物仍與所述膜結(jié)合，而所述目的多肽主要在流出物中；

c.從所述陽離子交換膜收集包含所述目的多肽的流出物；

d.使包含所述目的多肽的膜流出物進行陽離子交換層析純化步驟，和

e.從所述陽離子交換層析純化步驟的流出物中回收純化的多肽。

5.權(quán)利要求4的方法，其中所述pH低于所述多肽的pI約1至約4個pH單位。

6.權(quán)利要求4的方法，其中所述pH低于所述多肽的pI約1至約3個pH單位。

7.權(quán)利要求4的方法，其中所述pH低于所述多肽的pI約1至2個pH單位。

8.權(quán)利要求4的方法，其中所述pH對于所述多肽的pI約1個pH單位。

9.權(quán)利要求4的方法，其中所述電導率為≤約20mS/cm。

10.權(quán)利要求4的方法，其中所述電導率為≤約10mS/cm。

11.權(quán)利要求4的方法，其中所述陽離子交換膜是陽離子交換單塊過濾器或厚度過濾器。

12.提高用于蛋白質(zhì)純化的下游層析步驟的效率的方法，其包括：

(a)在包含緩沖液的操作條件下，使包含目的多肽和多種污染物的組合物通過陰離子交換膜，其中所述多肽和膜具有相反的電荷，所述緩沖液具有高于所述多肽pI約1至約5個pH單位的pH和≤約40mS/cm的電導率，所述操作條件導致所述膜與多肽以及至少一種污染物結(jié)合；

b.過載所述陰離子交換膜，以使所述至少一種污染物仍與膜結(jié)合，而所述目的多肽主要在流出物中；

c.從所述陰離子交換膜收集包含所述目的多肽的流出物；

d.使包含所述目的多肽的膜流出物進行陰離子交換層析純化步驟，和

e.從所述陰離子交換層析純化步驟的流出物中回收純化的多肽。

13.權(quán)利要求12的方法，其中所述pH高于所述多肽的pI約1至約4個pH單位。

14.權(quán)利要求12的方法，其中所述pH高于所述多肽的pI約1至約3個pH單位。

15.權(quán)利要求12的方法，其中所述pH高于所述多肽的pI約1至約2個pH單位。