[發(fā)明專利]一種用于改善精子發(fā)生的VEGFc蛋白緩釋納米顆粒及其應用

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• 申請日: 2018-07-23
• 公開（公告）號: CN108685874A
• 公開（公告）日: 2018-10-23
• 發(fā)明（設計）人: 趙亮宇;李錚;姚晨成;薛云靖;劉納川;楊超;荊濤;田汝輝;陳慧興;李朋;朱子玨
• 申請（專利權）人: 上海市第一人民醫(yī)院
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K38/18;A61P15/08
• 代理公司: 上海卓陽知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 巫蓓麗

本發(fā)明涉及一種用于改善精子發(fā)生的VEGFc蛋白緩釋納米顆粒，所述納米顆粒是通過VEGFc蛋白的肝素結(jié)合域?qū)EGFc和葡聚糖硫酸酯結(jié)合，形成緊密的聚陰離子；再通過電荷相互吸引的方式將殼聚糖與之結(jié)合，形成較為穩(wěn)定的納米顆粒。本發(fā)明還提供上述納米顆粒在長期營養(yǎng)生精細胞、促進生殖細胞的增殖、改善精子發(fā)生中的應用。其優(yōu)點在于：(1)本發(fā)明的納米材料具有良好的均一性、穩(wěn)定性和生物安全性；(2)本發(fā)明的納米材料能夠緩慢穩(wěn)定釋放VEGFC因子，在體內(nèi)能夠長期營養(yǎng)生精細胞，促進生殖細胞的增殖，從而改善無精子癥模型小鼠的精子發(fā)生過程，為臨床治療由于生精細胞增殖不足引起的非梗阻性無精子癥患者提供參考。

技術領域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術領域，具體地說，是一種用于改善精子發(fā)生的VEGFc蛋白緩釋納米顆粒及其應用。

背景技術

血管內(nèi)皮生長因子(Vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)家族成員VEGFC以往因介導淋巴管和器官形成備受關注。最近研究發(fā)現(xiàn)VEGFC還是調(diào)控各類細胞增殖、凋亡與器官發(fā)育的關鍵因子。一項針對神經(jīng)干細胞的研究表明，VEGFc/VEGFR3通路能夠通過自分泌途徑激活靜息期的神經(jīng)干細胞，使其進入細胞周期，生成祖細胞。此外，本發(fā)明人所在課題組前期研究表明，在男性生殖系統(tǒng)中，VEGFc因子可以通過結(jié)合特異表達于精原細胞的VEGFc受體——VEGFR3對于小鼠精原起到促增殖與抗凋亡的雙重作用；對于臨床樣本的研究發(fā)現(xiàn)，生精障礙患者睪丸表達VEGFC蛋白的能力較生精正常人有所下降，提示其與非梗阻性無精子癥的發(fā)病有關系。以上研究提示VEGFc因子作為一種促進淋巴管生長、激活神經(jīng)干細胞增殖與調(diào)節(jié)精子發(fā)生的關鍵因子在臨床上治療相關疾病的可能性。

但是，通常而言，細胞因子作為一種效應蛋白，在體內(nèi)外環(huán)境中均不能長期穩(wěn)定存在，我們的研究發(fā)現(xiàn)，VEGFc因子在最常見的DMEM培養(yǎng)基中，其半衰期僅為48小時左右，也就是說若通過局部注射VEGFC因子的方式給藥，除去機體本身對于藥物的代謝，其在特定組織內(nèi)能夠達到治療劑量的濃度時間也通常不會超過1周；另外，在睪丸中，由于血睪屏障的存在，直接注射進睪丸生精小管間隙即睪丸間質(zhì)的生長因子往往因為難以進入生精小管內(nèi)而在生精環(huán)境中達不到有效治療濃度，目前常用的解決方法是通過睪丸輸出小管逆行注射進生精小管中，但是這種注射屬于有創(chuàng)操作，對于輸出小管和生精小管均具有一定的損傷，無法長期反復給藥。所以，上述因素極大地限制了VEGFC發(fā)揮其生理功能從而降低了治療效果。

現(xiàn)有技術存在以下缺點：(1)VEGFc作為一種活性蛋白，其在室溫環(huán)境下的培養(yǎng)基中與生物體內(nèi)的半衰期極短，據(jù)測量數(shù)據(jù)，體外培養(yǎng)環(huán)境下其半衰期僅為2d左右，而人的正常生精周期為70天左右，一次給藥難以長期維持局部的治療所需要的有效藥物濃度，要想達到治療效果，必須長期多次注射藥物。(2)眾所周知，生精細胞存在于生精小管中，精子發(fā)生的過程依賴于一個相對封閉的生精微環(huán)境，由支持細胞和管周細胞之間得緊密連接、生精小管基底膜和血管內(nèi)皮細胞構(gòu)成的血睪屏障參與維持了生精微環(huán)境的穩(wěn)定，這意味著一般的給藥途徑，包括口服、靜脈注射甚至睪丸間質(zhì)注射都不能使VEGFC這類蛋白分子進入生精微環(huán)境中。采用通過輸出小管逆行注射藥物進入生精小管管腔內(nèi)的方式給藥，這種方法屬于有創(chuàng)操作，被穿刺過的輸出小管往往由于炎癥與瘢痕增生而梗阻無法再次進行注射。

中國專利申請：CN102210675A公開了一種吲哚-2，3-二酮在制備改善生精障礙藥物中的應用，所述的吲哚-2，3-二酮為天然產(chǎn)物或人工合成產(chǎn)品，其毒性低，副作用小，具有良好的改善生精障礙、促進生育的作用。但是關于本發(fā)明一種用于改善精子發(fā)生的VEGFc蛋白緩釋納米顆粒及其應用目前還未見報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個目的是針對現(xiàn)有技術的不足，提供一種緩慢釋放VEGFc蛋白的納米顆粒。

本發(fā)明的第二個目的是針對現(xiàn)有技術的不足，提供一種用于改善精子發(fā)生的VEGFc蛋白緩釋納米顆粒的應用。