[發(fā)明專利]一種用于改善精子發(fā)生的VEGFc蛋白緩釋納米顆粒及其應用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810812697.0 | 申請日： | 2018-07-23 |
| 公開（公告）號： | CN108685874A | 公開（公告）日： | 2018-10-23 |
| 發(fā)明（設計）人： | 趙亮宇;李錚;姚晨成;薛云靖;劉納川;楊超;荊濤;田汝輝;陳慧興;李朋;朱子玨 | 申請（專利權）人： | 上海市第一人民醫(yī)院 |
| 主分類號： | A61K9/51 | 分類號： | A61K9/51;A61K38/18;A61P15/08 |
| 代理公司： | 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262 | 代理人： | 巫蓓麗 |
| 地址： | 200080 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 納米顆粒 精子發(fā)生 生精細胞 生殖細胞 增殖 蛋白 長期營養(yǎng) 納米材料 無精子癥 緩釋 精子發(fā)生過程 葡聚糖硫酸酯 肝素結合域 生物安全性 非梗阻性 聚陰離子 臨床治療 模型小鼠 電荷 均一性 殼聚糖 應用 體內 參考 釋放 吸引 | ||
1.一種用于改善精子發(fā)生的VEGFc蛋白緩釋納米顆粒，其特征在于，所述納米顆粒是通過VEGFc蛋白的肝素結合域將VEGFc和葡聚糖硫酸酯結合，形成緊密的聚陰離子；再通過電荷相互吸引的方式將殼聚糖與之結合，形成較為穩(wěn)定的納米顆粒。
2.根據權利要求1所述納米顆粒，其特征在于，所述納米顆粒的制備方法如下：
(1)將人重組VEGFc蛋白粉劑溶解于磷酸鹽緩沖液；
(2)將步驟(1)中得到的溶液放入透析盒中透析過夜；
(3)使用振蕩器將步驟(2)中透析完成的VEGFC溶液與濃度為1％的葡聚糖硫酸酯溶液(雙蒸水配制)混合；
(4)使用乙酸和乙酸鈉配制的乙酸緩沖液，將殼聚糖溶解于乙酸緩沖液中配制成殼聚糖溶液；
(5)將步驟(4)中的殼聚糖溶液逐滴加入至步驟(3)的葡聚糖硫酸酯溶液中，振蕩5min；
(6)向步驟(5)制得的溶液中加入硫酸鋅，轉動30min；
(7)將制成品放入甘露醇磷酸鹽緩沖液中透析24h，注意避光；
(8)將透析好的制成品通過濾網過濾，超速離心后制成凍干粉，-80℃保存，即可制得。
3.根據權利要求2所述納米顆粒，其特征在于，步驟(1)中的磷酸鹽緩沖液是濃度為50Mm，PH＝7的磷酸鹽緩沖液；步驟(1)中VEGFC因子的終濃度為1mg/ml。
4.根據權利要求2所述納米顆粒，其特征在于，所述葡萄糖硫酸酯是500kDa的葡聚糖硫酸酯。
5.根據權利要求2所述納米顆粒，其特征在于，步驟(4)所述乙酸緩沖液是PH＝6的乙酸緩沖液；步驟(4)所述殼聚糖是15kDa的高脫乙酰度殼聚糖，殼聚糖溶液是濃度為0.1％的殼聚糖溶液。
6.根據權利要求2所述納米顆粒，其特征在于，步驟(7)所述甘露醇磷酸鹽緩沖液是濃度為5％的甘露醇磷酸鹽緩沖液。
7.權利要求1-6任一所述的納米顆粒在制備治療生精障礙的藥物中的應用。
8.根據權利要求7所述應用，其特征在于，所述納米顆粒的使用方法為：(1)通過睪丸輸出小管注射的方式將此納米顆粒注入睪丸生精小管管腔中；(2)通過局部給藥的方式將此納米顆粒注射進入不適宜反復注射的特定局部機體。
9.一種用于改善精子發(fā)生的VEGFc蛋白緩釋納米顆粒的制備方法，包括如下步驟：
(1)將人重組VEGFc蛋白粉劑溶解于磷酸鹽緩沖液；
(2)將步驟(1)中得到的溶液放入透析盒中透析過夜；
(3)使用振蕩器將步驟(2)中透析完成的VEGFC溶液與濃度為1％的葡聚糖硫酸酯溶液(雙蒸水配制)混合；
(4)使用乙酸和乙酸鈉配制的乙酸緩沖液，將殼聚糖溶解于乙酸緩沖液中配制成殼聚糖溶液；
(5)將步驟(4)中的殼聚糖溶液逐滴加入至步驟(3)的葡聚糖硫酸酯溶液中，振蕩5min；
(6)向步驟(5)制得的溶液中加入硫酸鋅，轉動30min；
(7)將制成品放入甘露醇磷酸鹽緩沖液中透析24h，注意避光；
(8)將透析好的制成品通過濾網過濾，超速離心后制成凍干粉，-80℃保存，即可制得。
10.根據權利要求9所述方法，其特征在于，所述納米顆粒的制備所需時間為3天。
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