[發明專利]一種基于InDel分子標記鑒定辣椒雄性不育三系配套雜交種真實性和純度的方法

有效

• 申請號: 201810811212.6
• 申請日: 2018-07-23
• 公開（公告）號: CN108893555B
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發明（設計）人: 林多;王莉月;王輝;馬靜;楊延杰;代佳汐;劉建萍
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 青島合創知識產權代理事務所(普通合伙) 37264
• 代理人: 王曉曉

本發明提供了一種基于InDel分子標記鑒定辣椒雄性不育三系配套雜交種真實性和純度的方法。其方法為：將辣椒雜交種和親本培育至芽苗期，提取DNA，應用核心引物對雜交種和親本進行篩選，只有共顯性標記的引物可以作為該雜交種真實性鑒定的分子標記。若辣椒雜交種和親本在核心引物庫中無法篩選出共顯性標記，則結合次級核心引物庫中繼續篩選，直至篩選出共顯性標記。本發明建立的快速、同時鑒定辣椒雄性不育三系配套雜交種真實性和純度的體系，可實現不受時間和季節的限制，對雜交種的真實性和純度進行室內快速鑒定。對辣椒雄性不育三系配套雜交種品種保護和雜交種子市場監管提供分子生物學依據。

技術領域

本發明屬于辣椒育種技術領域，具體涉及一種基于InDel分子標記鑒定辣椒雄性不育三系配套雜交種真實性和純度的方法。

背景技術

加工型辣椒是辣椒品種中的重要類型，為重要的調味品和色素提取來源，我國播種面積為世界第二，僅次于印度。辣椒雄性不育三系配套雜交種比常規品種有明顯的整齊度、高產優質和抗性強等優勢，其種植面積和需求在不斷增加。加工型辣椒品種更新換代極快，不僅審定品種繁多且不同品種間的相似性很大、差異性很少，肉眼一般不易準確辨別。種子的真假事關農業豐產，與農民的切身利益相關。在生產和銷售的過程中，加工型辣椒雄性不育三系配套雜交種質量制辣椒雜交種子的真實性與純度是加工型辣椒種子質量的一個重要衡量指標。因此一個鑒定準確，鑒定周期短的加工型辣椒雜交種真實性和純度鑒定方法尤為重要。如何快速高效地進行雜交種的真實性和純度鑒定，成為了目前需要解決的重要問題。

傳統田間形征鑒定種子真實性和純度的方法，具有周期長、易受環境和人為因素影響等缺陷，鑒定結果嚴重滯后。分子標記鑒定方法，基于分子生物學的理論基礎與分子水平上的鑒別，相比田間形態學鑒定在時間勞動力和準確性上更有優勢。目前辣椒中用于真實性和純度鑒定的分子標記鑒定方法有SRAP標記，SSR 標記和InDel標記。InDel標記作為近年新興的一種分子生物技術，為錨定標記，無重復序列，穩定性強，準確性高，適用性廣。其鑒定成本低，操作簡單，結果快速可靠，實用性強序等優點，在基因組中分布均勻。SR標又稱微衛星序列標記，其兩端序列多為保守的單拷貝序列，多態性豐富，易于檢測，但是由于SSR 序列的重復性，使得他在不同品種間的擴增帶型不同。而InDel標記的帶型比較單一，擴增效率相比SSR標記更高。儀澤會(2012)表明，對于有些位點的SSR 序列無差異的位點，在其側翼序列中存在InDel序列差異。SRAP標記是對 ORFs(開放閱讀框)進行擴增，簡單高效、高共顯性、重復性、易于分離條帶及測序等優點,在基因組中分布均勻的優點，但是由于是對ORFs進行擴增，所以在著絲點附近擴增較少，擴增不均勻。姜童(2017)InDel分子標記CIDH776 可用于三對加工型辣椒雄性不育系與保持系(15005A、15006B，16011A、16012B，16063A、16064B)間的分子標記輔助鑒定。張曼(2012)篩選出用于辣椒品種 JP-6和H-4真實性鑒定的SSR引物CA885。李亞利(2010)用互補型SRAP引物DC1-EM9和ME5-EM20對航椒4號和航椒5號進行純度純度鑒定但是由于是對ORFs進行擴增，所以在著絲點附近擴增較少，擴增不均勻。

目前在辣椒上有幾種真實性和純度鑒定的方法，大多都是對單個品種的鑒定。因不同的加工型辣椒品種之間基因型有所差異，每個雜交種的真實性鑒定引物都不同，不同品種之間的真實性和純度鑒定引物并不通用，每個加工型辣椒品種都必須有自己引物。在辣椒，尤其在加工型辣椒領域沒有一套完整的適用性廣的快速鑒定辣椒雄性不育三系配套雜交種真實性的方法。且目前在辣椒中的純度鑒定沒有和真實性鑒定結合，即使進行了純度鑒定，仍無法確定所鑒定種子的真實性。

發明內容

本發明的目的是提供了一種基于InDel分子標記鑒定辣椒雄性不育三系配套雜交種真實性和純度的方法。

為實現上述發明目的，本發明采用以下技術方案予以實現：

本發明提供了一種基于InDel分子標記鑒定辣椒雄性不育三系配套雜交種真實性和純度的方法，所述鑒定方法包括以下步驟：