[發明專利]一種利用液質聯用技術檢測蛋白粉的磷脂的方法

有效

• 申請號: 201810804176.0
• 申請日: 2018-07-20
• 公開（公告）號: CN108896680B
• 公開（公告）日: 2021-05-04
• 發明（設計）人: 葉少文;蘇昭侖;李珍
• 申請（專利權）人: 湯臣倍健股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/14
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 張春水;唐京橋

本發明屬于分析化學的技術領域，尤其涉及一種利用液質聯用技術檢測蛋白粉的磷脂的方法。本發明的方法包括：單獨配制磷脂酰乙醇胺PE、磷脂酰絲氨酸PS和磷脂酰肌醇PI的梯度濃度的工作標準液，采用HPLC?MS/MS聯用技術檢測，以濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標，繪制標準工作曲線；其中，HPLC系統條件為：以C4色譜柱或其同等性能的色譜柱為固定相；取待測樣品用溶劑超聲波提取，離心、過濾獲得供試品溶液，按照HPLC?MS/MS聯用技術檢測，代入到標準工作曲線中獲得待測樣品中磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸或磷脂酰肌醇的濃度。本發明解決目前沒有一種能在蛋白粉中定量檢測PE、PS、PI的含量的技術缺陷。

技術領域

本發明屬于分析化學的技術領域，尤其涉及一種利用液質聯用技術檢測蛋白粉的磷脂的方法。

背景技術

磷脂(Phospholipid)，也稱磷脂類、磷脂質，是指含有磷酸的脂類，屬于復合脂。磷脂是組成生物膜的主要成分，分為甘油磷脂與鞘磷脂兩大類，分別由甘油和鞘氨醇構成。磷脂為兩性分子，一端為親水的含氮或磷的頭，另一端為疏水(親油)的長烴基鏈。由于此原因，磷脂分子親水端相互靠近，疏水端相互靠近，常與蛋白質、糖脂、膽固醇等其它分子共同構成脂雙分子層，即細胞膜的結構。其中，磷脂根據甘油骨架的不同可以分為磷酸甘油脂(glycerolphospholipid)和鞘磷脂(sphingolipid)。它們都是極性脂。極性脂由極性部分(叫做極性頭)和非極性部分(叫做非極性尾)組成。其中，甘油磷脂又可以根據極性頭部集團的不同區分為磷脂酰膽堿(Phosphatidyl cholines,PC)、磷脂酰乙醇胺(Phosphatidylethanolamines,PE)、磷脂酰絲氨酸(Phosphatidyl serines,PS)、磷脂酰肌醇(Phosphatidyl inositols,PI)、磷脂酰甘油(PG)、甘油磷脂酸(phosphatidic acid,PA)等。

目前檢測磷脂的方法較多，主要檢測方法有色譜分析方法、質譜檢測方法、化學法、酶法等方法。其中色譜和質譜檢測方法最為準確，因為在蛋白粉基質成分復雜，使得現有技術難以分離并準確檢測出蛋白粉的磷脂類物質。因此，目前，還沒有一種能在蛋白粉中定量檢測磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰絲氨酸(PS)和磷脂酰肌醇(PI)的方法。

發明內容

有鑒于此，本發明公開了一種利用液質聯用技術檢測磷脂的方法，有效解決目前沒有一種能在組合物中定量檢測磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰絲氨酸(PS)和磷脂酰肌醇(PI)的含量的技術缺陷。

本發明提供了一種利用液質聯用技術檢測磷脂的方法，包括：

步驟1、單獨配制磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸和磷脂酰肌醇的梯度濃度的工作標準液，采用HPLC-MS/MS聯用技術檢測，以濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標，繪制標準工作曲線；

其中，HPLC系統條件為：

以C4色譜柱或其同等性能的色譜柱為固定相，以甲醇和乙腈為流動相A的有機相、以含乙酸銨的水溶液為流動相A的水相，以含乙酸銨的異丙醇為流動相B進行梯度洗脫；

步驟2、取待測樣品用溶劑超聲波提取，離心、過濾獲得供試品溶液，按照步驟1中HPLC-MS/MS聯用技術檢測，得到的結果代入到所述標準工作曲線中獲得待測樣品中磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸或磷脂酰肌醇的濃度，其中，待測樣品包括磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸和磷脂酰肌醇。

作為優選，采用HPLC-MS/MS聯用技術的ESI中性丟失模式分析。

作為優選，所述C4色譜柱或其同等性能的色譜柱的柱溫為30-50℃。

作為優選，所述HPLC的流速為0.3-0.6mL/min。

作為優選，所述甲醇∶所述乙腈∶所述含乙酸銨的水溶液的體積比為1∶1∶3；其中所述含乙酸銨的水溶液的乙酸銨的濃度為5mmol/L。