[發明專利]一種鴨圓環病毒的體外增殖及培養方法有效
| 申請號： | 201810793855.2 | 申請日： | 2018-07-19 |
| 公開（公告）號： | CN108841795B | 公開（公告）日： | 2022-02-11 |
| 發明（設計）人： | 李兆龍;黃喻;傅光華;豐志華;陳江華 | 申請（專利權）人： | 福建省農業科學院畜牧獸醫研究所 |
| 主分類號： | C12N7/00 | 分類號： | C12N7/00;C12N5/078 |
| 代理公司： | 福州市鼓樓區京華專利事務所(普通合伙) 35212 | 代理人： | 林曉琴 |
| 地址： | 350000 *** | 國省代碼： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 圓環 病毒 體外 增殖 培養 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種鴨圓環病毒的體外增殖及培養方法，其特征在于：包括如下步驟：
（1）采集健康成年番鴨血，進行PBMC的分離培養，制備PBMC細胞懸液；
（2）將檢測為鴨圓環病毒陽性的病料，按常規方法勻漿后用PBS 按1:5稀釋，然后再用0.45微米的濾膜過濾，將濾液按10%加入到所述PBMC細胞懸液中培養；
其中步驟（1）中所述PBMC細胞懸液的制備方法，包括以下步驟：
A、血液采集及外周血淋巴細胞的分離
使用肝素抗凝管，采集成年番鴨血，輕微上下混勻，在無菌操作下，將鴨血與PBS按1:2混勻；取1倍體積的Ficoll淋巴細胞分離液于離心管，將鴨血與PBS的混合液緩慢加入到淋巴細胞分離液上；將離心管轉移至離心機進行離心，6000rpm離心20分鐘，離心結束后分層，并吸取外周血淋巴細胞層；
B、細胞培養
在無菌狀態下，吸取外周血淋巴細胞層轉移至離心管中，2000rpm離心5分鐘，棄去上清；用含10%番鴨血清的RPMI1640培養液重懸細胞并轉移至培養皿中進行培養，培養條件為5% CO2、溫度37℃、濕度100%，得到PBMC細胞懸液。
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