[發明專利]一種微量RNA的提取方法

有效

• 申請號: 201810782364.8
• 申請日: 2018-07-17
• 公開（公告）號: CN108866042B
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發明（設計）人: 陳欣欣;葉國棟;許劍雄;陳茂立;韓大雄;郭奇偉;肖劍萍;蔡逸民;楊燕燕;李順杰;董康梅;朱莎莎;張麗芳;宋丹
• 申請（專利權）人: 廈門生命互聯科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 廈門市精誠新創知識產權代理有限公司 35218
• 代理人: 秦華

1.一種微量RNA的提取方法，其特征在于，包括如下步驟:

樣本裂解：取樣本，加入裂解液，渦旋混勻，室溫靜置，使樣本中的血小板完全裂解并釋放出RNA；其中樣本的體積量少于100個細胞，或1×10⁵個血小板；所述裂解液含異硫氰酸胍和糖原；

RNA分離：用緩沖液沉淀RNA，并使其吸附于磁珠B實現從樣本中分離RNA，其中緩沖液含有異丙醇和LiCl；

RNA純化：加入80％乙醇，渦旋混勻，將其置于磁力架上靜置，待磁珠完全吸附于管底和管壁，移去管中液體，重復洗滌1次，移去離心管中液體后，開蓋使酒精完全揮發；將管從磁力架上取下，加入洗滌液D，渦旋混勻，室溫放置，期間間隔輕彈混勻；再加入同樣體積的洗滌液W，渦旋混勻，室溫靜置；將管置于磁力架上靜置，待磁珠完全吸附于管底和管壁，移去離心管中液體；再加入80％乙醇，渦旋混勻；將其置于磁力架上靜置，待磁珠完全吸附于管底和管壁，移去離心管中液體，再重復此步驟；短暫離心，將磁珠收集于管底，將管置于磁力架上靜置，待磁珠完全吸附于管底，移去離心管中液體，開蓋靜置使殘留的酒精完全揮發即可；

所述洗滌液D：10mM Tris-HCl pH7.5，2.5mM MgCl₂，0.1mM CaCl₂，0.2U/μL DNAse I，

洗滌液W：0.3M異硫氰酸胍，0.1W/V％20mg/mL糖原，80W/V％異丙醇；RNA洗脫步驟：采用含核酸保護劑的洗脫液進行洗脫獲得穩定的RNA溶液。

2.根據權利要求1所述微量RNA的提取方法，其特征在于，所述裂解液配方為：5M異硫氰酸胍，20mM EDTA，10mM Tris-HCl pH6.4，0.1％20mg/mL糖原。

3.根據權利要求1所述微量RNA的提取方法，其特征在于，所述RNA分離為，緩沖液的配方為2M LiCl，80W/V％異丙醇。

4.根據權利要求1所述微量RNA的提取方法，其特征在于，所述RNA分離為，加入等體積緩沖液，顛倒混勻后短暫離心將液體甩下；再加入1/10體積磁珠B懸浮液渦旋混勻，室溫靜置；再將其置于磁力架上靜置，待磁珠完全吸附于管底和管壁，移去離心管中液體。

5.根據權利要求1所述微量RNA的提取方法，其特征在于，所述RNA洗脫為，將管從磁力架上取下，加入洗脫液，輕彈混勻，短暫離心甩下；將管置于磁力架上靜置，待磁珠完全吸附于管底，轉移洗脫液至干凈的離心管中即可。