[發明專利]肺癌預后新型分子標志物非編碼RNA LINC01124的應用、試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 201810742139.1
• 申請日: 2018-07-09
• 公開（公告）號: CN108753978A
• 公開（公告）日: 2018-11-06
• 發明（設計）人: 田田
• 申請（專利權）人: 鄭州大學第一附屬醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/686;C12N15/113
• 代理公司: 鄭州科維專利代理有限公司 41102
• 代理人: 王理君

1.肺癌預后新型分子標志物非編碼RNA LINC01124在制備預測肺癌患者預后的制劑的應用，該非編碼RNA LINC01124的核酸序列如SEQ NO:1所示。

2.根據權利要求1所述的肺癌預后新型分子標志物非編碼RNA LINC01124的應用，其特征在于：所述的用于預測肺癌患者預后的制劑為實時熒光定量PCR檢測試劑盒。

3.一種如權利要求2所述的試劑盒，其特征在于：包括用于檢測非編碼RNA LINC01124表達的特異性引物，所述特異性引物的核酸序列為SEQ NO:2和SEQ NO:3，以及內參基因TUBA1A表達的引物序列，所述引物的核酸序列為SEQ NO:4和SEQ NO:5。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于：還含有從組織中提取RNA并進行逆轉錄及實時熒光定量PCR的所有試劑，包括(1)從肺癌的腫瘤或正常對照組織中抽提總RNA所用試劑，包括Trizol液、氯仿、異丙醇、抑制RNA降解溶劑、75％乙醇，DEPC水；(2)以總RNA為模板將非編碼RNALINC01124逆轉錄為cDNA所用試劑，包括逆轉錄反應緩沖液、含有含Mg2+的三磷酸堿基脫氧核苷酸dNTP、逆轉錄酶M-MLV以及隨機引物和Oligo dT引物的混合物；(3)將cDNA實時熒光定量PCR所用試劑，包括LINC01124實時熒光定量PCR特異性引物、TUBA1A內參特異性PCR引物、實時熒光定量SYBR染料、無RNA酶的水。

5.肺癌預后新型分子標志物非編碼RNA LINC01124的檢測方法，其特征在于：包括以下步驟：1）收集待測肺癌或正常對照組織；

2) 組織中RNA的抽提；

3）LINC01124 RNA的逆轉錄，以細胞總RNA為模板，逆轉錄得到cDNA；

4）以cDNA為模板，利用非編碼RNA LINC01124的特異性引物進行實時熒光定量PCR擴增，檢測非編碼RNA LINC01124表達量。

6.根據權利要求5所述肺癌預后新型分子標志物非編碼RNA LINC01124的檢測方法，其特征在于：步驟3）中逆轉錄反應體系為5×RT Buffer（含Mg2+和dNTP） 4μl，10×RT PrimerMix（Oligo dT Primer和Random Hexamers混合物） 2μl，BeyoRT? II M-MLV逆轉錄酶(RNase H-)（含RNase Inhibitor）2μl，DEPC-treated water 2μl，去除gDNA后的Total RNA10μl。

7.根據權利要求5所述肺癌預后新型分子標志物非編碼RNA LINC01124的檢測方法，其特征在于：步驟4）中檢測標志物非編碼RNA LINC01124的表達量用相對定量方法。