[發明專利]一種藥用植物白云參的組織培養方法

在審

• 申請號: 201810740374.5
• 申請日: 2018-07-07
• 公開（公告）號: CN108739404A
• 公開（公告）日: 2018-11-06
• 發明（設計）人: 曾祥飛;張金渝;楊美權;鄧清;楊紹兵;左應梅;鄧先能;蔣元省;尹進超
• 申請（專利權）人: 云南澈川生物科技有限公司;云南省農業科學院藥用植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 上海諾衣知識產權代理事務所(普通合伙) 31298
• 代理人: 韓國輝

本發明公開了一種藥用植物白云參的組織培養方法，主要包括以下步驟：(1)外植體的選擇、(2)叢生芽誘導、(3)叢生芽增殖、(4)生根誘導等步驟，本發明成功建立了白云參的無性繁殖體系，為實現對白云參野生資源的保護、栽培、和對種苗的需求以及基因庫的建立奠定了技術基礎，解決野生白云參產量低、供應少的短缺問題。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種藥用植物白云參的組織培養方法。

背景技術

白云參，又名土黨參，為桔?？平疱X豹屬草質纏繞藤本大花金錢豹(Campanumoeajavanica Bl.subsp.javanica)，主產于紅河州和文山州大部分地區，生長在海拔400-1800米的向陽草坡或叢林中。白云參以根莖入藥，味甘、微苦，性溫，無毒，入肺、脾、腎三經。具有健脾胃、補肺氣、祛痰止咳的功效。主治虛勞內傷、肺虛咳嗽、脾虛泄瀉、乳汁不多、小兒疳積、遺尿癥等，為貴州苗族習用藥材。十九世紀三十年代毛燦文先生將白云參與草烏、三七、斷節參等配伍，對風濕麻木、筋骨疼痛、跌打損傷、創傷流血有顯著療效。1936年正式以“七星虎力散”在云南注冊出售，1958年，將“虎力散”名稱進行批量生產。目前全國有11家制藥企業以白云參為原料藥生產相關制劑。由于長期采挖，白云參野生資源已嚴重不足，無法滿足日益增長的生產需求。目前白云參少有人工種植，繁殖方式為種子繁殖，存在繁殖率低、生長期長等劣勢，為解決白云參資源短缺問題，本實驗開展了白云參組織培養技術研究，通過組培快繁大量生產組培苗以實現人工規模化種植。

發明內容

本發明的目的是提供一種白云參的組織培養方法，具繁殖周期短、繁殖率高、生長周期短(較種子繁殖少一年種植周期)等優勢，適合大面積種植，解決白云參野生資源短缺與保護的問題。

本發明所采用的技術方案是，一種白云參的組織培養方法，按照以下步驟進行：

(1)選擇外植體：選擇白云參帶芽莖段為外植體，用洗潔精稀釋液清洗莖段并在自來水下沖洗干凈；

(2)消毒滅菌：將莖段轉至超凈工作臺上，放入無菌瓶中，加入75％酒精消毒5-8s，無菌水洗1次，加入飽和漂白粉溶液消毒10-15min，無菌水洗2次，再用0.05％升汞溶液消毒7-10min，無菌水洗6次；

(3)叢生芽誘導：將消毒好的莖段放在無菌吸水紙上吸干表面水分，剪去莖段切口處褐化部分，接種至初代誘導培養基中培養，誘導叢生芽；所述初代誘導培養基為：WPM/MS+ZT 0.5-1.0mg/L+2,4-D0.05-0.1mg/L+糖25-30g/L+瓊脂4.5-5g/L，PH為5.8-6.0；

(4)叢生芽增殖：將步驟(3)誘導出的嫩芽剪下，剪成1-2芽/段的大小，接種至增殖培養基中培養，誘導叢生芽增殖；所述增殖培養基為：WPM/MS+ZT 0.5-1.0mg/L+2,4-D0.03-0.05mg/L+糖25-30g/L+瓊脂4.5-5g/L，PH為5.8-6.0；

(5)壯苗生根：將步驟(4)誘導的叢生芽切下，接種至生根培養基中培養；所述生根培養基為：1/2WPM或1/2MS+NAA 0.5-1.0mg/L+IBA 0.1-0.2mg/L+活性炭0.4-0.6g/L+土豆30-50g/L+糖25-30g/L+瓊脂4.5-5g/L，PH為5.8-6.0；

上述方法中，步驟(3)、(4)、(5)所用培養基都經過高溫濕熱滅菌，121℃/25min。

上述方法中，步驟(3)、(4)、(5)所用培養條件均為：溫度25±2℃，空氣相對濕度50％-60％，光照強度2000Lx，光照時間12小時/天。