[發(fā)明專利]可提高卵巢顆粒細胞活性的蒲公英提取物的制備及其應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810739219.1
• 申請日: 2018-07-06
• 公開（公告）號: CN108785354A
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發(fā)明（設計）人: 邵輝;白莉
• 申請（專利權）人: 德州德潤生物科技有限公司
• 主分類號: A61K36/288
• 分類號: A61K36/288;A61P15/08
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

可提高卵巢顆粒細胞活性的蒲公英提取物的制備及其應用，以干燥蒲公英為原料，通過提取、濃縮、酸化、上柱、純化等得到蒲公英提取物。本發(fā)明制備的蒲公英提取物經實驗表明：能使卵巢中顆粒細胞數量增殖；能使卵巢中顆粒細胞中FSHR、LHR、IGFR、CPY19A1mRNA表達的受體量顯著增加、并促進卵巢中E2、P激素分泌增強；減少臨床用藥量及減少對促卵藥的耐藥性有顯著效果。以上三方面，實驗表明蒲公英提取物提高卵巢顆粒細胞活性中，其差異顯著具有統計學意義（P＜0.05）。

技術領域

本發(fā)明涉及中藥領域，具體涉及一種可提高卵巢顆粒細胞活性的蒲公英提取物的制備工藝及其應用。

背景技術

蒲公英是一味珍貴的中草藥，在我國分布和應用都非常廣。別名有婆婆丁，黃花丁等，是菊科多年生菊科植物，主產分布于北半球溫帶和亞寒帶地區(qū)。味苦，性寒，歸肝胃經。具清熱解毒，消腫散結，利膽利尿功效。用于疔瘡腫毒，乳癰，瘰疬，目赤，咽痛，肺癰，腸癰，濕熱黃疸，熱淋澀痛。國外對藥用蒲公英的化學成分研究比較全面，主要含黃酮、倍半萜和三萜類成分，具有抗菌、抗炎、抗肝損傷、抗腫瘤、抗氧化等多種生物活性。蒲公英及其制劑在臨床上常用于上呼吸道感染、膽囊炎和急性黃疸性肝炎、乳腺炎、胃炎、消化道潰瘍和闌尾炎等疾病。對丘腦下部，腦垂體為中心的性激素有激活作用，增加小鼠脾淋巴細胞的增殖，對體外培養(yǎng)心肌細胞有保護作用，增強機體免疫功能，抗毛囊蠕性螨活性，抗疲勞等藥理作用。

卵巢是雌性動物生殖系統的重要生殖器官，具有兩方面的重要作用，一是產生成熟卵子，二是分泌類固醇激素。顆粒細胞是卵巢的主要功能細胞，也是卵巢所分泌雌激素，孕激素的重要合成場所。顆粒細胞的增殖和分化可作為卵泡發(fā)育的標志。顆粒細胞是成熟卵泡中最大的細胞群、女性體內惟一表達的細胞，卵母細胞的代謝都需要通過顆粒細胞滿足。通過間隙連接從周圍的顆粒細胞媒介中攝取小分子代謝物如能量底物、核苷酸和氨基酸等。

當今社會推遲生育現象普遍，高齡不孕成為一種社會問題，越來越多的女性尋求輔助生殖技術助孕。但隨著生育年齡的增長，女性卵巢功能逐漸衰退，而體外受精治療的成功依賴于高質量的卵子和精子，有效的超促排卵非常必要。卵巢低反應即是超促排卵過程中出現的卵巢對促性腺激素刺激反應不良的一種病理狀態(tài)，促性腺激素用量多，但發(fā)育的成熟卵泡數量少、水平低，最終導致妊娠結局不良。卵巢低反應發(fā)生率占治療婦女的9%～24%，周期取消率高達76%，而妊娠率則低至3.2%～14%，是目前困擾臨床醫(yī)生的最棘手難題之一。

發(fā)明內容

針對現有技術存在的不足，本發(fā)明提供了一種可提高卵巢顆粒細胞活性的蒲公英提取物的制備工藝及其應用，并增加卵泡局部刺激激素的分泌，提高卵巢對于促排卵藥物反應，降低用藥劑量，從而改善臨床用藥量及耐藥性的重要途徑。

本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種可提高卵巢顆粒細胞活性的蒲公英提取物的制備工藝，以干燥蒲公英為原料，通過提取、濃縮、酸化、上柱、純化得到蒲公英提取物，具體工藝步驟如下：

（1）蒲公英提?。簩⒏稍锲压⒔葜寥軇┘儍羲羞M行水煎，純凈水的質量為蒲公英全草的15～20倍，水煎提取的溫度控制在90～100℃，水煎次數為2次，每次3小時，然后將兩次得到的提取液合并，然后將提取液通過120目濾網過濾，得濾液；

（2）濃縮：將濾液進行減壓濃縮，除去溶劑，濃縮可溶性固形物為40%～45%，從而得到蒲公英濃縮液；

（3）酸化：將2%質量濃度的鹽酸加入至蒲公英濃縮液中，調PH至3～4，然后靜置24小時后進行離心，得到蒲公英上清液；

（4）上層析柱洗脫：將蒲公英上清液進行柱層析，采用DE-52纖維素，20mmol/ltris溶脹，用PH計調PH為8，使用20mmol/ltris洗脫柱子直到流出來的液體不再變色為止，再用3mol/l氯化鈉洗脫柱子，用純凈水洗脫至電導率為≤10us/cm，最后再用0.2mol/l氫氧化鈉洗脫，氫氧化鈉洗脫得到的液體進行濃縮；