[發明專利]厚殼貽貝谷胱甘肽過氧化物酶--一種新型的海洋污染檢測標記物

在審

• 申請號: 201810737728.0
• 申請日: 2018-07-06
• 公開（公告）號: CN108913670A
• 公開（公告）日: 2018-11-30
• 發明（設計）人: 郭寶英;葉瑩瑩;劉碩博
• 申請（專利權）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: C12N9/08
• 分類號: C12N9/08;C12N15/53;C12Q1/6888
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 吳秉中

本發明公開了厚殼貽貝谷胱甘肽過氧化物酶基因，其為克隆基因，通過基因克隆技術獲得。本發明還公開一種新型海洋生物污染檢測標記物，用厚殼貽貝作為檢測海洋污染的生物樣本，厚殼貽貝谷胱甘肽過氧化物酶基因用作海洋污染的檢測標記物。本發明通過基因克隆技術獲得的厚殼貽貝谷胱甘肽過氧化物酶基因，其在厚殼貽貝的消化腺中的相對表達量最高，克隆用引物合適、能增大PCR反應的成功性，克隆用裂解液能夠保持所得總RNA的完整性、提高總RNA的得率和純度；本發明利用厚殼貽貝谷胱甘肽過氧化物酶用作新型海洋生物污染檢測標記物，該檢測標記物特異性強，靈敏度高。

技術領域

本發明涉及分子生物技術領域，尤其是涉及厚殼貽貝谷胱甘肽過氧化物酶--一種新型的海洋污染檢測標記物。

技術背景

我國東海地區海域帶處于海洋與陸地的過渡地帶，陸地工農業生產、海洋產業開發等排放的廢水多在此匯集。其中重金屬、石油類(BAP)等污染物易通過吸附等作用結合到懸浮顆粒物或膠體表面而被沉淀富集，會對底棲生物產生較大的影響。有研究表明，生物組織中標志物活性（含量）與環境中污染物含量呈一定相關性，因此，研究東海海域沉積物中污染物的含量變化，能夠為篩選生物標志物提供基礎數據，同時有利于初步掌握不同區域的污染特征和來源，對于應用生物標志物法評價周圍人類活動對海域環境的生態壓力有重要作用。

厚殼貽貝（Mytilus coruscus）俗稱“海紅”，隸屬軟體動物門、雙殼綱、貽貝目，是一種棲息于海水中的常見雙殼經濟貝類，北至遼寧大連，南至福建東山均有分布，以浙江沿海資源量最大，其軟體部蛋白質含量較高，鮮味氨基酸和必需氨基酸組成豐富，微量元素構成合理，屬營養價值和經濟價值都較高的海產貝類。但隨著近年來沿海城市工業化進程的加速，厚殼貽貝繁殖的周邊海域水質、環境因子持續惡化，生境污染不斷加劇，作為一種典型的濾食性潮間帶生物，厚殼貽貝因具有個體較大，生活史較長，活動性差，容易采集，對環境污染物（如重金屬、病原微生物等）具有很強的耐受性等特征，常被作為環境指示生物來監測海區環境的變化。厚殼貽貝在解毒過程中會大量產生氧自由基，谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）具有清除脂質過氧化物、過氧化氫，減輕有機氫過氧化物的功能，可以減少機體解毒過程中產生的活性氧自由基，防止細胞膜等生物組織受到氧化損傷。其在受到刺激后會做出相應的反應，應對環境對其產生的毒理效應。因此，可以選擇厚殼貽貝的谷胱甘肽過氧化物酶作為檢測海洋環境污染的指示分子。生物體在分子水平上的改變可以反應污染物對生物的早期作用，因而可作為靈敏的指標，用于檢測污染對海洋生物個體、種群、生態系統的影響，從而達到預測海洋污染和保護海洋生物及生態系統的目的。同時，也可以應用到水產養殖業，用于檢測水質的變化。

發明內容

本發明的目的之一在于提供一種通過基因克隆技術獲得的厚殼貽貝谷胱甘肽過氧化物酶基因，其在厚殼貽貝的消化腺中的相對表達量最高，克隆用引物合適、能增大PCR反應的成功性，克隆用裂解液能夠保持所得總RNA的完整性、提高總RNA的得率和純度。

本發明的目的之而在于提供一種利用厚殼貽貝谷胱甘肽過氧化物酶用作新型海洋生物污染檢測標記物，該檢測標記物特異性強，在分子水平上能夠直接以生物體內靶細胞或靶分子為反應終點進行靈敏的生物學反應，對海洋污染物暴露和毒性效應有預警作用。

本發明針對背景技術中提到的問題，采取的技術方案為：

厚殼貽貝谷胱甘肽過氧化物酶基因，谷胱甘肽過氧化物酶基因為克隆基因，通過基因克隆技術獲得。本發明通過基因克隆技術首次克隆出厚殼貽貝谷胱甘肽過氧化物酶的基因核心片段、全長及特異性引物；篩選出厚殼貽貝谷胱甘肽過氧化物酶在不同組織表達量的高低，其中消化腺相對表達量最高。