[發明專利]單鏈環狀核酸及其制備方法和應用有效
| 申請號： | 201810734128.9 | 申請日： | 2018-07-05 |
| 公開（公告）號： | CN109161572B | 公開（公告）日： | 2021-11-12 |
| 發明（設計）人： | 梁興國;安然;崔一笑 | 申請（專利權）人： | 中國海洋大學 |
| 主分類號： | C12P19/34 | 分類號： | C12P19/34;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 肖麗 |
| 地址： | 266000 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 鏈環 核酸 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種單鏈環狀核酸的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括：
經連接酶連接，使與成環輔助鏈雜交后的線性核酸兩端閉合，得到所述單鏈環狀核酸；
其中，所述線性核酸具有發夾結構，所述發夾結構位于所述線性核酸與所述成環輔助鏈的雜交處；
所述成環輔助鏈與所述線性核酸的3’端和5’端互補；
所述發夾距離連接處1-3nt；
所述線性核酸的長度為54-200nt；
所述發夾結構的Tm值高于連接反應溫度20-40℃；
將所述線性核酸、成環輔助鏈、連接酶和連接緩沖液混合為同一連接體系，進行連接反應。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，將所述線性核酸進行二級結構模擬，選擇穩定的發夾結構作為所述線性核酸的雜交處。
3.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述連接反應的時間為1-5小時。
4.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述連接反應的緩沖液為標準緩沖液的0.1-1倍。
5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述連接酶為可連接雙鏈DNA、雙鏈RNA或DNA-RNA雜交鏈中的切刻部分的連接酶。
6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述連接酶為T4 DNA連接酶、T4 RNA連接酶、T3 DNA連接酶、T7 DNA連接酶或E.coli DNA連接酶中的任意一種。
7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述線性核酸的濃度為1-100μM。
8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述線性核酸的濃度為5-50μM。
9.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述線性核酸與所述成環輔助鏈的摩爾比為1:1-5。
10.根據權利要求9所述的制備方法，其特征在于，所述線性核酸與所述成環輔助鏈的摩爾比為1:1-3。
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