[發(fā)明專利]女貞苷和特女貞苷在促進體外培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞增殖和抑制復制性衰老中的應用

有效

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• 申請日: 2018-07-05
• 公開（公告）號: CN108823158B
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發(fā)明（設計）人: 彭麗華;許學寒;歐陽宏偉
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 邱啟旺

本發(fā)明公開了女貞苷和特女貞苷在促進體外培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞增殖和抑制復制性衰老中的應用，所述女貞苷和特女貞苷共存。女貞苷和特女貞苷具有促進體外培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞增殖作用，同時還具有抑制復制性衰老的作用，為臨床治療提供足夠的干細胞。其中女貞苷和特女貞苷為市售高純度的女貞苷和特女貞苷(含量≥98％),也可按常規(guī)方法進行制備。其優(yōu)點是：女貞苷和特女貞苷可促進骨髓間充質(zhì)干細胞增殖且可以抑制復制性衰老，為治療骨缺損、軟骨缺損、肝臟纖維化、心肌梗死、肺纖維化和糖尿病等組織工程和干細胞治療提供足夠的細胞,同時減少機體免疫排斥反應。

所屬技術領域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，具體涉及女貞苷和特女貞苷在促進體外培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞增殖和抑制復制性衰老中的應用。

背景技術

骨髓間充質(zhì)干細胞作為一種細胞型藥物，在骨缺損、軟骨缺損、肝臟纖維化、心肌梗死、肺纖維化和糖尿病等疾病中有著廣泛的廣闊的應用前景。但是，商業(yè)化的生產(chǎn)過程中，骨髓間充質(zhì)干細胞的生產(chǎn)規(guī)模往往難以擴大。其中骨髓間充質(zhì)干細胞增殖速度慢，在復制過程中的已衰老，干性丟失是限制其生產(chǎn)規(guī)模擴大，阻礙干細胞應用和轉(zhuǎn)化的兩大主要原因。

骨髓間充質(zhì)干細胞來源于發(fā)育早期的中胚層和外胚層，在骨髓中含量極低，其增殖速度緩慢。在生物體內(nèi)，這樣一方面可以外界信號作出反應，以決定細胞的發(fā)展方向—增殖或分化；另一方面可以減少基因突變的危險，使細胞有時間發(fā)現(xiàn)并糾正處于增殖周期中的錯誤。然而，在商業(yè)化的干細胞生產(chǎn)過程中，這一特性，一方面限制了干細胞生產(chǎn)的規(guī)模，一方面也延長了干細胞生產(chǎn)的周期。

衰老是生命體發(fā)展過程中的正常生理現(xiàn)象，骨髓間充質(zhì)干細胞在體外培養(yǎng)過程中，在有絲分裂20到40代后會發(fā)生Hayflick現(xiàn)象，即復制性衰老現(xiàn)象。該現(xiàn)象伴隨著細胞形態(tài)由原來的成纖維樣的紡錘體型發(fā)生肥大化，衰老相關的β-半乳糖苷酶活性的增強，分化能力的丟失和細胞增殖停滯。此外，復制性的壓力還導致在細胞衰老過程中DNA損傷的不斷積累，有研究表明由于復制叉的停止引起的復制壓力可誘導端粒DNA發(fā)生損傷。在MSC體外復制過程中，端粒DNA的長度以30—120bp/PD的速度不斷縮短。同時，復制性衰老還會引起MSC釋放的細胞因子、生長因子以及蛋白酶發(fā)生變化，導致這些蛋白所作用的細胞和組織的微環(huán)境發(fā)生顯著變化。復制性衰老已成為MSC臨床應用領域最大的瓶頸之一，限制了MSC在商業(yè)化與工業(yè)化中的大規(guī)模生產(chǎn)。

因此，尋找和發(fā)現(xiàn)能夠加速骨髓間充質(zhì)干細胞擴增速度和程度，抑制其復制性衰老的成分是加速和擴大干細胞臨床應用的關鍵步驟。目前國內(nèi)外采用在骨髓間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)環(huán)境中加入生長因子等生物大分子可促進干細胞的增殖和抑制復制性衰老。但是生長因子等重組蛋白產(chǎn)量低，成本極高，且生物半衰期短，非常不穩(wěn)定，難以得到廣泛的應用。因此急需尋找替代性的活性成分用于加速干細胞的增殖和抗復制性衰老，解決干細胞的數(shù)量問題，從而加速其臨床應用與產(chǎn)業(yè)化。

女貞子(Ligustri Lucidi Fructμs)，又名冬青子，為木犀科植物女貞(Ligustrumlucidum Ait.)的干燥成熟果實。始載于成書于東漢時期的《神農(nóng)本草經(jīng)》，書中謂其“女貞實，味苦平，主補中，安五臟，養(yǎng)精神，除百病”，被列為上品。明朝李時珍謂其“果實強陰健腰膝，變白發(fā)，明目”，于《本草綱目》記載女貞子氣味苦、平、無毒，能補中、安五臟、養(yǎng)精神、除百病。及至現(xiàn)代，2010版《中華人民共和國藥典》記載女貞子的功能與主治為“滋補肝腎，明目烏發(fā)。用于肝腎陰虛，眩暈耳鳴，腰膝酸軟，須發(fā)早白，目暗不明，內(nèi)熱消渴，骨蒸潮熱”。