[發明專利]miRNA-340靶基因結合序列、重組質粒及其應用

有效

• 申請號: 201810706843.1
• 申請日: 2018-07-02
• 公開（公告）號: CN108998451B
• 公開（公告）日: 2021-03-05
• 發明（設計）人: 阮慶國;邊江;劉芮伶;王紹文;耿雯雯
• 申請（專利權）人: 深圳先進技術研究院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/63;C12N1/19;C12N5/10;C12N15/66;C12Q1/6876
• 代理公司: 深圳中一聯合知識產權代理有限公司 44414
• 代理人: 李艷麗

1.一種miRNA-340靶基因結合序列，其特征在于，所述miRNA-340靶基因結合序列應用于檢測miRNA-340對IL-17A基因調控作用，其中，所述序列為SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7。

2.一種重組質粒，其特征在于，該重組質粒包括如權利要求1所述的miRNA-340靶基因結合序列。

3.根據權利要求2所述的重組質粒，其特征在于，所述重組質粒從5’端至3’端依次包括如下元件：啟動子序列、報告基因、如權利要求1所述的miRNA-340靶基因結合序列和終止序列。

4.根據權利要求3所述的重組質粒，其特征在于，該重組質粒包括熒光素酶報告基因質粒pmir-GLO和所述miRNA-340靶基因結合序列，所述miRNA-340靶基因結合序列位于所述熒光素酶報告基因質粒的NheI酶切位點和XhoI酶切位點之間。

5.一種宿主細胞，其特征在于，該宿主細胞含有如權利要求2-4任一項所述的重組質粒。

6.一種如權利要求4所述的重組質粒的構建方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

以小鼠基因組DNA為模板，以(i)SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示核苷酸序列或(ii)SEQ ID No.9和SEQ ID No.10所示核苷酸序列或(iii)SEQ ID No.11和SEQ ID No.12所示核苷酸序列或(iv)SEQ ID No.13和SEQ ID No.14所示核苷酸序列或(v)SEQ ID No.15和SEQ ID No.16所示核苷酸序列為引物，進行PCR擴增；

將PCR擴增所得序列連接至熒光素酶報告基因質粒pmir-GLO的多克隆位點。