[發明專利]一種重組枯草芽孢桿菌及其應用

有效

• 申請號: 201810703969.3
• 申請日: 2018-06-30
• 公開（公告）號: CN109055288B
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發明（設計）人: 余志良;音建華;裘娟萍;孫東昌;趙春田;王剛
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C02F3/34;C12R1/125;C02F101/38
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

1.一種重組枯草芽孢桿菌在降解多肽類抗生素中的應用，其特征在于所述重組枯草芽孢桿菌是將SEQ ID NO.1所示基因片段與線性化pWBUC01載體連接后轉入枯草芽孢桿菌獲得的；所述多肽類抗生素為多粘菌素E。

2.如權利要求1所述的應用，其特征在于所述枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis ）WB800。

3.如權利要求1-2之一所述的應用，其特征在于所述重組枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）WB800/pWBUC01-apr，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏日期2017年11月27日，保藏編號為：CCTCC NO: M 2017732，保藏地址為中國武漢，武漢大學，郵編430072。

4.如權利要求1所述的應用，其特征在于所述應用方法為：將重組枯草芽孢桿菌經發酵培養獲得的濕菌體用pH為5~10的磷酸緩沖溶液清洗后懸浮配制成OD₆₀₀為0.4~5.0的菌懸液；將菌懸液以體積濃度2-16%的接種量接種至含終濃度為5000~15000U/mL多粘菌素E的LB液體培養基中，在37℃、50~250r/min條件下培養，獲得多粘菌素E降解的培養液；所述LB液體培養基組成為：酵母粉 1.0~10.0 g/L、胰蛋白胨 2.0~25.0 g/L、氯化鈉2.0~25.0 g/L，溶劑為去離子水，pH 5~10。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于所述濕菌體按如下方法制備：將重組枯草芽孢桿菌接種至含5~100μg/mL卡那霉素LB固體培養基，于37℃倒置培養12~72h后，挑選單菌落接種在LB液體培養基中，37℃、50~250r/min培養12~72h，獲得種子液；隨后按體積濃度2~16%的接種量接種至LB液體培養基，37℃、50~250r/min培養12~72h，取培養結束后的菌液在4000~12000r/min的轉速下離心2~20min后，棄上清液，收集濕菌體；LB固體培養基終濃度組成：酵母粉 1.0~10.0 g/L、胰蛋白胨 2.0~25.0 g/L、氯化鈉2.0~25.0 g/L，瓊脂15.0~25.0g/L，溶劑為去離子水，pH 5~10。

6.一種重組枯草芽孢桿菌在修復多肽類抗生素污染水體中的應用，其特征在于所述重組枯草芽孢桿菌是將SEQ ID NO.1所示基因片段與線性化pWBUC01載體連接后轉入枯草芽孢桿菌獲得的；所述多肽類抗生素為多粘菌素E。

7.如權利要求6所述的應用，其特征在于所述的應用是將重組枯草芽孢桿菌經發酵培養獲得的濕菌體用pH為5~10的磷酸緩沖溶液清洗后懸浮配制成OD₆₀₀為0.4~5.0的菌懸液；將菌懸液以體積濃度2-16%的接種量接種至多肽類抗生素污染水體中，在30℃、50~250r/min條件下培養，獲得多肽類抗生素降解的培養液。

8.如權利要求6所述的應用，其特征在于所述多肽類抗生素污染水體中多肽類抗生素終濃度為5000~20000U/mL。