[發(fā)明專利]一種表位多肽串聯(lián)混合物在抗立氏立克次體的免疫保護(hù)中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810685625.4
• 申請(qǐng)日: 2018-06-28
• 公開（公告）號(hào): CN108794636B
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 焦俊;胡凌飛;熊小路;汪鵬程;陳晨;溫博海;周冬生;楊文慧;楊慧盈;殷喆;王巖;趙月娥;靳愛軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C12N15/62;A61K39/02;A61P31/04
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;秦夢(mèng)楠

本發(fā)明公開了一種表位多肽串聯(lián)混合物在抗立氏立克次體的免疫保護(hù)中的應(yīng)用。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)立氏立克次體的一種表位多肽串聯(lián)混合物作為一種抗原，能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答對(duì)抗立氏立克次體毒株攻擊，為具有落基山斑點(diǎn)熱疫苗功能的保護(hù)性抗原。此表位多肽串聯(lián)混合物可通過(guò)基因工程制備，其與菌體蛋白疫苗相比，具有制備方法簡(jiǎn)單、成本低、產(chǎn)量高、更安全等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明對(duì)于落基山斑點(diǎn)熱的防疫和治療具有重大價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種表位多肽串聯(lián)混合物在抗立氏立克次體的免疫保護(hù)中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

立氏立克次體(Rickettsia rickettsii)作為一種革蘭氏陰性染色的胞內(nèi)寄生小桿菌，是斑點(diǎn)熱群立克次體(spotted fever group rickettsia,SFGR)中毒力最強(qiáng)的一個(gè)種，為落基山斑點(diǎn)熱(Rocky Mountain Spotted Fever,RMSF)的病原菌，RMSF在自然界主要通過(guò)蜱叮咬傳播，在北美地區(qū)分布廣泛。由于立氏立克次體的高致病性、致死率以及可經(jīng)氣溶膠形式傳播，它已被列為生物戰(zhàn)劑之一和潛在的生物恐怖劑。

落基山斑點(diǎn)熱是一種嚴(yán)重威脅人類健康的人獸共患自然疫源性疾病，最早在美國(guó)被發(fā)現(xiàn)。RMSF患者的早期臨床表現(xiàn)主要有高熱、頭痛和肌肉酸痛，如若治療不及時(shí)，立氏立克次體在體內(nèi)迅速擴(kuò)散，后期病情嚴(yán)重者可出現(xiàn)血壓下降、急性肺水腫、腎衰和/或循環(huán)衰竭，并發(fā)心和腦后遺癥，在暴發(fā)型病例可因心跳突然停止而死亡。在無(wú)有效抗生素治療的情況下，RMSF致死率高達(dá)60-80％。并且RMSF早期癥狀缺乏特異性，很難與其他疾病相區(qū)分，難以做到早發(fā)現(xiàn)早治療。有效疫苗預(yù)防接種誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生持久的抗立氏立克次體特異性免疫是預(yù)防RMSF發(fā)生和流行的最有效手段。

二十世紀(jì)內(nèi)，RMSF疫苗的研制主要集中在滅活疫苗上。初期，研究人員主要采用立氏立克次體感染蜱的內(nèi)臟勻漿或純化雞胚卵黃囊中培養(yǎng)的立氏立克次體后制備甲醛滅活的立氏立克次體全菌疫苗(whole cell vaccine,WCV)，但研究表明免疫保護(hù)效果并不理想。1975年美國(guó)陸軍傳染病研究所用雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)立氏立克次體后通過(guò)蔗糖密度梯度離心純化，將純化菌體用甲醛滅活后制成滅活疫苗，在隨后進(jìn)行的人體保護(hù)性試驗(yàn)中證明該疫苗可以保護(hù)1/4的接種者，接種后患者的發(fā)熱反應(yīng)減輕，四環(huán)素的治療更有效，但是該滅活疫苗僅提供有限的保護(hù)作用，遠(yuǎn)沒(méi)有達(dá)到有效疫苗保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)。另外制備立氏立克次體滅活疫苗通常需要細(xì)胞或雞胚大量培養(yǎng)立克次體，其純化的防護(hù)要求高、工藝復(fù)雜、費(fèi)時(shí)費(fèi)力，因此難以大量制備和推廣使用。

隨著分子生物學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展以及對(duì)RMSF疫苗研究的不斷深入，人們將目光轉(zhuǎn)向了亞單位疫苗研究。研究發(fā)現(xiàn)立氏立克次體外膜蛋白A(OmpA)、外膜蛋白B(OmpB)免疫產(chǎn)生的抗體可以中和立克次體對(duì)小鼠的致死毒性，給予OmpA及OmpB的單克隆抗體可以保護(hù)豚鼠有效抵抗致死劑量的立氏立克次體的感染并交叉保護(hù)小鼠抵抗死劑量的康氏立克次體(R.conorii)的感染。另外，研究證明立氏立克次體YbgF免疫也能提供小鼠抗立氏立克次體的特異性免疫保護(hù)。這些單一表面蛋白盡管具有一定的免疫保護(hù)作用，但是其免疫保護(hù)效果有限苗。因此，鑒定立氏立克次體的保護(hù)性抗原表位，研發(fā)更加安全、有效、持久的亞單位疫苗對(duì)預(yù)防RMSF具有重大的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種表位多肽串聯(lián)混合物在抗立氏立克次體的免疫保護(hù)中的應(yīng)用。

本發(fā)明首先保護(hù)一種重組多表位肽，包括序列表的序列1至序列12所示的表位肽。

所述重組多表位肽由序列表的序列1至序列12所示的表位肽組成。

所述重組多表位肽是如下(a)或(b)：

(a)由序列表中序列13所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；

(b)將序列13的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列13衍生的蛋白質(zhì)。