[發明專利]受試物致敏性檢測方法及其試劑盒

有效

• 申請號: 201810677953.X
• 申請日: 2018-06-27
• 公開（公告）號: CN108896759B
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 環飛;程潔;秦珩;靳蘇香;王玉邦;張靜姝;嚴婷;張成香;李世芬;王軍;董昊;張璐璐;胡艷輝;錢雯;章婉
• 申請（專利權）人: 南京醫科大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;A61D7/00
• 代理公司: 南京艾普利德知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32297
• 代理人: 周海斌

本發明涉及受試物致敏性檢測方法及其試劑盒。該檢測方法包括：取若干小鼠，隨機分組；測量每組各小鼠的雙耳厚度；進入第一時間段；在第一時間段內，每天在每組各小鼠的雙耳耳部涂抹等量試劑；進入第二時間段；在第二時間段結束時，針對每組各小鼠，先測量小鼠的雙耳厚度，再處死小鼠并于無菌條件下取小鼠雙側耳后淋巴結并制成細胞懸液，向細胞懸液加入5?溴脫氧尿嘧啶核苷溶液并作培養，然后采用ELISA法測定5?溴脫氧尿嘧啶核苷的含量；按限定標準判斷受試物致敏性。本發明能鑒定受試物是否致敏性陽性，不需對動物腹腔注射以減輕動物痛苦；5?溴脫氧尿嘧啶核苷用量大幅減少，利于降低檢測成本。

技術領域

本發明涉及一種受試物致敏性檢測方法及其試劑盒，屬于醫學檢測技術領域。

背景技術

據發明人所知，致敏性的外源化學物刺激機體時，機體易產生過敏反應，而判斷化學物是否具有致敏性，就需要通過動物試驗來檢測。

目前常用的檢測方法采用向動物腹腔注射受試物的方式，但是這會讓動物產生痛苦，不符合動物福利“3R”原則。同時，該檢測方法中會用到價格較貴的5-溴脫氧尿嘧啶核苷(即BrdU)，每只鼠的用量達5mg，而一次檢測試驗每組最低使用20只小鼠，也即每組需要至少100mg的BrdU，使整個檢測成本居高不下。亟待研發減輕動物痛苦以符合動物福利“3R”原則、且降低檢測成本的檢測方法。

經檢索發現，以申請號CN201711285287.7、申請公布號CN107966562A、名稱《一種重組柯薩奇病毒B3注射液致敏性的檢測評價方法》的中國發明專利申請為代表的現有技術中，并沒有給出解決上述技術問題的技術手段或技術教導。

發明內容

本發明的主要目的是：克服現有技術存在的問題，提供一種受試物致敏性檢測方法，能鑒定受試物是否致敏性陽性，不需對動物腹腔注射以減輕動物痛苦，5-溴脫氧尿嘧啶核苷(即BrdU)用量大幅減少，利于降低檢測成本。同時，本發明還提供與該檢測方法相配的試劑盒。

本發明解決其技術問題的技術方案如下：

受試物致敏性檢測方法，其特征是，包括以下步驟：

第一步、取若干小鼠，隨機分成陰性對照組、陽性對照組、以及至少兩個受試組；每組小鼠數量相等，每組小鼠的數量為至少4只；

第二步、測量每組各小鼠的雙耳厚度；

第三步、進入第一時間段；在第一時間段內，每天在每組各小鼠的雙耳耳部涂抹等量試劑；陰性對照組涂抹的試劑為溶劑，陽性對照組涂抹的試劑為陽性對照物，各受試組涂抹的試劑為不同濃度的受試物；所述第一時間段為至少3天；

第四步、進入第二時間段，所述第二時間段為至少2天；在第二時間段結束時，針對每組各小鼠，先測量小鼠的雙耳厚度，再處死小鼠并于無菌條件下取小鼠雙側耳后淋巴結并制成細胞懸液，向細胞懸液加入5-溴脫氧尿嘧啶核苷溶液并作培養，然后采用ELISA法測定5-溴脫氧尿嘧啶核苷的含量；

第五步、針對陽性對照組和各受試組，計算每組的刺激性指標和致敏性指標；其中，刺激性指標為耳厚差百分比，且耳厚差百分比按下式計算：

致敏性指標為SI₃，且SI₃按下式計算：

式中，BrdU為5-溴脫氧尿嘧啶核苷；

對于陽性對照組，如果刺激性指標小于或等于25％，且致敏性指標大于或等于1.6并小于14，則本次檢測的試驗系統可靠；

對于各受試組，只要有一個受試組的致敏性指標大于或等于1.6、且刺激性指標小于或等于25％，則該受試物致敏性為陽性。