[發(fā)明專利]一種基于免疫磁珠的鹽酸克倫特羅樣本前處理試劑盒

在審

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• 申請日: 2018-06-24
• 公開（公告）號: CN108845125A
• 公開（公告）日: 2018-11-20
• 發(fā)明（設計）人: 張波;張學記;郗日沫;王鵬;雷少軍;張二林;孫驍帥
• 申請（專利權）人: 沭陽康源泰博生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/531;G01N33/94
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本發(fā)明提供一種基于免疫磁珠的鹽酸克倫特羅樣本前處理試劑盒的制備及應用，該試劑盒主要由樣本倉、試劑倉、清洗倉、洗脫倉等幾個部分組成。該操作方法高效快速、操作簡單、不需要大型儀器及特殊培訓的專業(yè)操作人員，樣品不需要特殊前處理，可廣泛應用于動物組織、水產品、肉制品等產品中鹽酸克倫特羅的富集與分離，對低于檢測極限的鹽酸克倫特羅樣品，通過免疫磁珠的富集作用以及免疫磁珠在液體中充分擴散使得結合表面積擴大，反應更加徹底，從而能夠改變檢測極限，提高檢測的靈敏度，避免漏檢的現(xiàn)象。

技術領域

本發(fā)明屬于分析檢測領域，具體涉及一種基于免疫磁珠的鹽酸克倫特羅樣本前處理試劑盒。

背景技術

鹽酸克倫特羅（俗稱瘦肉精）為一種人工合成的β腎上腺素興奮劑，具有擴張支氣管的作用，常用來防治哮喘、肺氣腫等肺部疾病。當其應用劑量達到治療量的5~10倍時，具有能量重分配作用，可使肌肉合成增加，脂肪沉積減少，因此俗稱為“瘦肉精”。在畜牧業(yè)生產中一些非法使用者將其作為一種生長促進劑添加到動物飼料中，用以改善胴體的品質，同時也造成食品中鹽酸克侖特羅的殘留，尤其是在豬的肝臟等內臟器官殘留較高，食用后直接危害人體健康。其主要危害是：出現(xiàn)肌肉振顫、頭疼、惡心、嘔吐等癥狀，特別是對高血壓、心臟病、甲亢和前列腺肥大等疾病患者危害更大，嚴重的可導致死亡。我國禁止在畜牧業(yè)中使用鹽酸克侖特羅。

目前，免疫檢測方法是使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。在測定時，把受檢標本（測定其中的抗原或抗體）和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開，最后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據(jù)顏色反應的深淺做定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地放大反應效果，從而使測定方法達到很高的靈敏度。但是，目前所用的固相載體存在問題有：批間差異不易控制，包裝操作繁復，自動化程度不高，不適宜大批量樣本的操作。

免疫磁珠是由作為載體的磁性微球和免疫配基結合而成的納米級材料。磁性微球載體通常是帶有氨基、羧基、羥基或巰基等化學官能團的磁珠，該官能團與不同的免疫配基如活性蛋白、抗體、抗原、親和素、生物素等結合形成免疫磁珠。磁性微球載體具有超順磁性特點，可使免疫磁珠置于磁場時，顯示其磁性，從磁場移出時，磁性消除，免疫磁珠重新分散。包被抗體的免疫磁珠作為固相載體，其上的抗體與相應抗原發(fā)生特異性結合形成抗原-抗體-磁珠復合物，這種復合物在磁場作用下，迅速向磁場移動，使復合物與其他物質分離，達到分離特異性抗原的目的，這種分離方法具有檢測速度快、特異性高、靈敏度高、重復性好等優(yōu)勢。免疫磁珠的磁分離方法可重復性好，操作簡單，不需昂貴的儀器設備，不影響被分離生物材料的生物學性狀和功能，并由于磁珠特殊的性能，可以將免疫檢測實現(xiàn)自動化，用于大規(guī)模樣本的檢測，其反應動力學較傳統(tǒng)免疫檢測方法快，并且具有更大的固相結合表面。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是為了彌補現(xiàn)有技術存在的不足，提供一種用于免疫磁珠的鹽酸克倫特羅樣本前處理試劑盒，用于樣本中鹽酸克倫特羅富集于凈化，以解決鹽酸克倫特羅樣本樣品凈化分離操作復雜、分離效率低的等技術問題。免疫磁珠經過適量活化劑（EDC-NHS組合）處理后，使得磁珠表面帶有親和配基，通過親和層析法與鹽酸克倫特羅抗體在合適的反應條件下進行偶聯(lián)，得到富集鹽酸克倫特羅抗體特異性免疫磁珠，使用鹽酸克倫特羅抗體特異性免疫磁珠對鹽酸克倫特羅的溶液進行吸附，以富集和純化樣本中鹽酸克倫特羅，以便后續(xù)的測量。

為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術方案如下：

一種基于免疫磁珠的鹽酸克倫特羅樣本前處理試劑盒，該試劑盒由樣本倉、試劑倉、清洗倉、洗脫倉等幾個部分組成。樣本倉用于放置樣本的前處理溶液，試劑倉用于放置免疫磁珠，免疫磁珠上偶聯(lián)了鹽酸克倫特羅抗體，清洗倉用于放置清洗液清洗，洗脫倉主要用于洗脫結合物。

基于上述免疫磁珠的鹽酸克倫特羅樣本前處理試劑盒，主要包括以下：