[發明專利]一種長期保存高蟲草素蛹蟲草菌種的方法

在審

• 申請號: 201810648019.5
• 申請日: 2018-06-22
• 公開（公告）號: CN108739053A
• 公開（公告）日: 2018-11-06
• 發明（設計）人: 劉曉紅
• 申請（專利權）人: 遼東學院
• 主分類號: A01G18/00
• 分類號: A01G18/00;A01G18/20
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 俞曉明

本發明公開了一種長期保存高蟲草素蛹蟲草菌種的方法，包括培養基的制備，且該培養基中含有青鮮素0.5～1份、龍舌蘭提取物30～50份、羧甲基纖維素鈉5～10份、三乙醇胺3～5份、水50～80份、PDA培養基400～500份；菌種培養；培養物脫水、菌種保存。本發明配制專用培養基用于蛹蟲草菌種的培養、保存，培養基中的青鮮素、龍舌蘭提取物配合使用可以抑制蛹蟲草菌種的生長，從而延長其保存壽命，羧甲基纖維素鈉能夠很好的保水，使保存的蛹蟲草菌種長期處于最佳狀態，進一步延長了保存期。本發明操作簡單、成本低，能夠很好的保存蛹蟲草菌種，經過本發明方法保存的蛹蟲草菌種，保存期能達到4年以上，遠遠高于常規方法。

技術領域

本發明屬于菌種保存技術領域，具體涉及一種長期保存高蟲草素蛹蟲草菌種的方法。

背景技術

蛹蟲草又名北蟲草、北冬蟲夏草等，屬于子囊菌門、肉座菌目、蟲草菌科、蟲草屬真菌，是一種食藥用蟲草。蛹蟲草富含蟲草素、蟲草酸及噴司他丁等具有抗癌、抗菌、抗疲勞及提高免疫等多種生物活性成分，其藥用價值與冬蟲夏草相似，有些成分甚至優于傳統的冬蟲夏草，因而已廣泛作為冬蟲夏草的替代品應用于藥用及食用菌領域。隨著人們對蟲草產品的藥用及保健等價值認識的不斷深入，對蛹蟲草資源及產品的需求也日益增加。

近年來，由于過度人工采挖，導致蛹蟲草野生資源嚴重匱乏；而在人工規模化生產過程中，也經常出現因菌種遺傳背景不清而引起菌種退化和變異嚴重等現象，造成子實體畸形、產量減少及品質下降等問題，制約著蟲草產業的發展與升級。微生物菌種保藏主要是通過延緩菌種的新陳代謝等，避免繼代培養過程中的菌種變異和污染，甚至死亡等問題的發生，保障菌種具有正常及穩定的生長特性及活力。

目前蛹蟲草菌種保藏中存在的主要問題是：保藏周期較短(一般為3～6個月)，菌種活力低(隨著保藏時間延長，子實體形成能力降低甚至無法形成子實體，易出現退化型菌株)。因此，很有必要開發出一種新的長期保存高蟲草素蛹蟲草菌種的方法，以延長菌種保藏周期，提高菌種活力。

發明內容

本發明提供了一種長期保存高蟲草素蛹蟲草菌種的方法，解決了現有技術中蛹蟲草菌種保藏周期較短，菌種活力低的問題。

本發明提供了一種長期保存高蟲草素蛹蟲草菌種的方法，包括以下步驟：

步驟1，培養基的制備

步驟1.1，按重量份稱取以下各組分：青鮮素0.5～1份、龍舌蘭提取物30～50份、羧甲基纖維素鈉5～10份、三乙醇胺3～5份、水50～80份、PDA培養基400～500份；

步驟1.2，將步驟1.1中稱取的青鮮素溶于步驟1.1稱取的三乙醇胺中，得到青鮮素的三乙醇胺溶液；

步驟1.3，將步驟1.1中稱取的羧甲基纖維素鈉溶于步驟1.1稱取的水中，得到水凝膠；

步驟1.4，將步驟1.1中稱取的龍舌蘭提取物、PDA培養基、步驟1.2中青鮮素的三乙醇胺溶液以及步驟1.3中的水凝膠混合均勻，得到蛹蟲草菌種培養基；

將蛹蟲草菌種培養基高溫滅菌后趁熱分裝于試管內，凝固成蛹蟲草菌種斜面培養基；

步驟2，菌種培養

在無菌條件下，將蛹蟲草菌種接種到步驟1.4中得到的蛹蟲草菌種斜面培養基上，先暗培養3～5d，然后進行光培養10～15d，培養結束得到蛹蟲草菌種培養物；

步驟3，培養物脫水

在無菌條件下，將蛹蟲草菌種培養物脫水至體積為原來的60～70％，得到脫水蛹蟲草菌種培養物；

步驟4，菌種保存

往裝有脫水蛹蟲草菌種培養物的試管中注入滅菌好的石蠟油，使石蠟油淹沒脫水蛹蟲草菌種培養物1cm以上，再用滅菌好的石蠟封口后置于于4℃下保存。