[發(fā)明專利]一種日本晚櫻“御衣黃”品種的組織培養(yǎng)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810646121.1
• 申請(qǐng)日: 2018-06-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108782247A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳傳紅;劉楠;古曉斌;彭瓔;吳欣
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東華理工大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 北京眾合誠(chéng)成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 夏艷

1.一種日本晚櫻“御衣黃”品種的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

步驟1)外植體材料的采集與處理、表面滅菌；

步驟2)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)；

步驟3)叢生芽增殖培養(yǎng)；

步驟4)根誘導(dǎo)培養(yǎng)；

步驟5)試管苗的煉苗與移栽。

2.如權(quán)利要求1所述的日本晚櫻“御衣黃”品種的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟1)于每年3月下旬至五月上旬有陽(yáng)光的午后，從日本晚櫻“御衣黃”母株上剪取當(dāng)年抽條的莖段3～6cm為外植體，切口用體積濃度70％酒精棉擦拭，置于滅菌過(guò)的廣口瓶中帶回實(shí)驗(yàn)室，莖段剪去葉片，莖段用流動(dòng)自來(lái)水沖洗3～5min后，用3～5％加酶洗衣粉液浸泡10～15min后，用毛刷輕刷去除附著雜質(zhì)，后在水龍頭下用流動(dòng)自來(lái)水沖洗0.5～1h，瀝干，在無(wú)菌條件下利用質(zhì)量濃度70％酒精浸泡，莖段浸泡15～20s后立即用無(wú)菌水沖洗2～3次，轉(zhuǎn)入加有0.25mL吐溫-80的質(zhì)量濃度為0.1％升汞的溶液中，使外植體完全被浸沒(méi)，帶芽莖段浸泡10～12min，其間不斷振蕩以保證外植體徹底消毒，再以無(wú)菌水再次沖洗4次，瀝干水分備用。

3.如權(quán)利要求1或2所述的日本晚櫻“御衣黃”品種的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟2)經(jīng)步驟1)表面滅菌后的莖段，用無(wú)菌濾紙吸干，切成1～2cm帶頂芽或者一個(gè)腋芽的莖段，接入裝有40mL芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中置于培養(yǎng)室中進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)。

4.如權(quán)利要求3所述的日本晚櫻“御衣黃”品種的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為：MS+6-BA 1.5～2.5mg/L+IBA 0～0.3mg/L+瓊脂0.7％+蔗糖4％；培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基pH值5.8～6.0，培養(yǎng)溫度26±1℃，培養(yǎng)室濕度55±5％，光照12h/d，光強(qiáng)度1600～2000Lx。

5.如權(quán)利要求1或4所述的日本晚櫻“御衣黃”品種的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟3)將步驟2)誘導(dǎo)出的幼嫩頂芽或者幼嫩側(cè)芽長(zhǎng)到1.5～2cm后，切成帶單芽莖段接入?yún)采吭鲋撑囵B(yǎng)基進(jìn)行芽增殖培養(yǎng)。

6.如權(quán)利要求5所述的日本晚櫻“御衣黃”品種的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述叢生增殖培養(yǎng)基配方為：MS+6-BA 1.0～2.5mg/L+IBA 0.1～0.3mg/L+GA₃0.2～0.4mg/L+瓊脂0.7％+蔗糖4％；培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基pH5.8～6.0，培養(yǎng)溫度26±1℃，培養(yǎng)室濕度為55±5％，光照12h/d，光強(qiáng)度1800～2000Lx。

7.如權(quán)利要求1所述的日本晚櫻“御衣黃”品種的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟4)經(jīng)叢生芽增殖培養(yǎng)35d后，將株高2～3cm的健壯無(wú)根單苗，保留1～2片展開(kāi)葉，接種于根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)培養(yǎng)。

8.如權(quán)利要求7所述的日本晚櫻“御衣黃”品種的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述根誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為：1/2MS+6-BA0.4～1.5mg/L+NAA 0.5～1.5mg/L+IBA 0.1～0.3mg/L+瓊脂0.7％+蔗糖4％+活性炭0.25g/L；培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基pH 5.8～6.0，培養(yǎng)溫度26±1℃，培養(yǎng)室濕度55±5％，光照12h/d，光強(qiáng)度1800～2200Lx。

9.如權(quán)利要求1、2、4、6-8任一項(xiàng)所述的日本晚櫻“御衣黃”品種的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟5)經(jīng)根誘導(dǎo)的試管苗根伸長(zhǎng)至2～2.5cm時(shí)，培養(yǎng)瓶從培養(yǎng)室移入蔭棚里開(kāi)蓋煉苗3～7d，期間濕度在85％以上、光照逐漸增加，以適應(yīng)外界環(huán)境，再把試管苗從培養(yǎng)瓶中移出，流動(dòng)自來(lái)水下清除根部附著的培養(yǎng)基后，用質(zhì)量濃度0.1％甲基托布津浸泡1～2分鐘后，移栽到事先用1～2g/L高錳酸鉀溶液消毒24小時(shí)的基質(zhì)中進(jìn)行培養(yǎng)，移栽框中基質(zhì)澆透水后利用遮陽(yáng)網(wǎng)遮陰60～80％，控制溫度在20～30℃、濕度在85％以上，7～10d后，逐漸轉(zhuǎn)入正常管理，可獲得健壯種苗；其中基質(zhì)是由質(zhì)量比為50％～60％的蛭石、25％～30％的泥炭土、15％～20％的珍珠巖組成，pH為5.5～6.0。