[發明專利]一種包含共刺激受體的嵌合抗原受體及應用

有效

• 申請號: 201810636409.0
• 申請日: 2018-06-20
• 公開（公告）號: CN110615842B
• 公開（公告）日: 2023-05-09
• 發明（設計）人: 楊選明;傅陽心;汪鑫;葉圣勤;李范林;張會會
• 申請（專利權）人: 上海隆耀生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N5/10;C12N15/867;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 俞滌炯

1.一種包含共刺激受體的嵌合抗原受體，其特征在于，所述嵌合抗原受體的結構為scFv(X)-(Y)CD3zeta-2A-(Z)；

其中，所述scFv(X)-(Y)CD3zeta為scFv-antihCD20-20BBZ，其序列如SEQ?ID?No.1所示；

Z為共刺激受體，所述共刺激受體選自OX40、HVEM、ICOS、CD27、4-1BB中的一種；

所述OX40的序列如SEQ?ID?No.2所示；所述HVEM的序列如SEQ?ID?No.3所示；所述ICOS的序列如SEQ?ID?No.4所示；所述CD27的序列如SEQ?ID?No.5所示；所述4-1BB的序列如SEQID?No.6所示；所述2A的序列如SEQ?ID?No.7、SEQ?ID?No.8、SEQ?ID?No.9或SEQ?ID?No.10所示。

2.一種由如權利要求1所述的嵌合抗原受體的重組表達載體構建的CAR-T細胞

3.根據權利要求2所述的CAR-T細胞的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一、慢病毒載體的構建及病毒生產；

將scFv(X)-(Y)CD3zeta，Z的中間加入2A形成融合蛋白，兩端加入慢病毒載體，并和慢病毒包裝質粒共同轉染，獲得scFv(X)-(Y)CD3zeta-2A-(Z)病毒；

步驟二、scFv(X)-(Y)CD3zeta-2A-(Z)CAR-T細胞的制備；

分離純化后的人PBMC經過培養后，感染步驟一獲得的scFv(X)-(Y)CD3zeta-2A-(Z)病毒，在合適的條件下進行細胞擴增，制備scFv(X)-(Y)CD3zeta-2A-(Z)CAR-T細胞。

4.根據權利要求3所述的CAR-T細胞的制備方法，其特征在于，所述慢病毒載體的構建及病毒生產的具體步驟包括：

將scFv(X)-(Y)CD3zeta，Z通過overlap?PCR在其中間加入2A形成融合蛋白，兩端加入酶切位點克隆慢病毒載體；將測序正確的克隆無內毒素大提，和慢病毒包裝質粒共同轉染，預定時間收取上清，過濾、離心濃縮病毒，獲得scFv(X)-(Y)CD3zeta-2A-(Z)病毒。

5.根據權利要求3所述的CAR-T細胞的制備方法，其特征在于，所述scFv(X)-(Y)CD3zeta-2A-(Z)CAR-T細胞的制備的具體步驟包括：將人PBMC經過分離純化后，接種到具有合適刺激條件的培養板，培養預定時間后，感染步驟一生產的scFv(X)-(Y)CD3zeta-2A-(Z)病毒，按照合適的刺激條件進行細胞擴增，經過2輪刺激擴增后，獲得的細胞即為scFv(X)-(Y)CD3zeta-2A-(Z)CAR-T細胞。

6.一種含有如權利要求2所述的CAR-T細胞的制劑。

7.如權利要求1所述的嵌合抗原受體，如權利要求2所述的CAR-T細胞在制備治療或預防腫瘤藥物中的應用。