[發明專利]基于AuNPs增強Na2

有效

• 申請號: 201810631328.1
• 申請日: 2018-06-19
• 公開（公告）號: CN108828030B
• 公開（公告）日: 2020-04-03
• 發明（設計）人: 梁汝萍;于祿丹;邱建丁
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26;G01N27/30;G01N27/327
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 趙艾亮

1.基于AuNPs增強Na₂S₂O₈/O₂的ECL效應的蛋白激酶檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

以AuNPs/巰基磷酸化多肽修飾電極為工作電極而構建三電極系統，將三電極系統置于Na₂S₂O₈/O₂溶液中，檢測AuNPs/巰基磷酸化多肽修飾電極的ECL信號，并根據加入的蛋白激酶濃度的對數與Na₂S₂O₈/O₂體系的ECL信號的強度之間的線性關系來實現對蛋白激酶活性的高靈敏檢測；或根據加入的蛋白激酶抑制劑濃度與Na₂S₂O₈/O₂的ECL信號的強度之間的線性關系來計算出蛋白激酶抑制劑的半抑制濃度，用于評價抑制劑對蛋白激酶活性的抑制效果；

其中，所述AuNPs/巰基磷酸化多肽修飾電極的制備方法包括如下步驟：

將7 μL殼聚糖溶液滴涂到清洗干凈的玻碳電極表面，晾干后，將電極浸入含5 mM N-乙基-N’-1-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、8 mM N-羥基琥珀酰亞胺和120 μM多肽的HEPES緩沖溶液中反應過夜，用超純水清洗電極表面后，將電極浸入含有100 μM巰基三磷酸腺苷和不同濃度蛋白激酶的三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽緩沖溶液中，在37 oC水浴中反應100min，用超純水清洗電極表面后，將電極置于AuNPs溶液中孵育1 h，制成AuNPs/巰基磷酸化多肽修飾電極。

2.如權利要求1所述的基于AuNPs增強Na₂S₂O₈/O₂的ECL效應的蛋白激酶檢測方法，其特征在于，所述三電極系統是以AuNPs/巰基磷酸化多肽修飾玻碳電極作為工作電極、鉑絲為對電極和Ag/AgCl電極作為參比電極而構建的三電極系統。

3.如權利要求1所述的基于AuNPs增強Na₂S₂O₈/O₂的ECL效應的蛋白激酶檢測方法，其特征在于，所述檢測AuNPs/巰基磷酸化多肽修飾電極的ECL信號是通過MPI-B型多參數化學分析測試系統測試光電倍增管高壓為800 V時AuNPs/巰基磷酸化多肽修飾玻碳電極在-1.8~0V電位范圍的ECL信號。

4.如權利要求1所述的基于AuNPs增強Na₂S₂O₈/O₂的ECL效應的蛋白激酶檢測方法，其特征在于，所述的Na₂S₂O₈/O₂溶液為含有0.1 M Na₂S₂O₈和0.1 M KCl的0.1 M pH 7.4的磷酸鹽緩沖溶液。

5.如權利要求1所述基于AuNPs增強Na₂S₂O₈/O₂的ECL效應的蛋白激酶檢測方法，其特征在于，所述的殼聚糖溶液的質量百分濃度為0.2%，配制方法為將殼聚糖加入到質量百分濃度為1%的醋酸溶液中超聲溶解。

6.如權利要求1所述基于AuNPs增強Na₂S₂O₈/O₂的ECL效應的蛋白激酶檢測方法，其特征在于，所述的三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽緩沖溶液的濃度為20 mM，pH為7.4，含20 mM的MgCl₂。