[發(fā)明專利]一種煙酰胺腺嘌呤二核苷酸類化合物生物合成方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810613079.3
• 申請日: 2018-06-14
• 公開（公告）號: CN110607335B
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發(fā)明（設計）人: 陳義華;丁勇
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12P19/36
• 分類號: C12P19/36;C12P17/12;C12P13/04;C12R1/19
• 代理公司: 北京紀凱知識產(chǎn)權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;秦夢楠

1.一種煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的合成方法，包括如下步驟：

(a)制備喹啉酸；

(b)喹啉酸在喹啉酸磷酸轉移酶的作用下與焦磷酸核糖反應生成煙酸單核苷酸；

(c)利用煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的補救合成途徑，完成從煙酸單核苷酸到酰胺腺嘌呤二核苷酸的制備；

所述喹啉酸的制備方法包括如下步驟：

(1)以分支酸為起始物，經(jīng)過轉氨重排反應生成氨基脫氧異分支酸；

(2)氨基脫氧異分支酸脫去丙酮酸部分生成2,3-二氫-3-羥基鄰氨基苯甲酸；

(3)2,3-二氫-3-羥基鄰氨基苯甲酸脫氫生成3-羥基鄰氨基苯甲酸；

(4)3-羥基鄰氨基苯甲酸通過氧化開環(huán)重排反應生成喹啉酸；

所述步驟(1)中，采用2-氨基-4-脫氧分支酸合酶催化分支酸轉氨重排生成氨基脫氧異分支酸；

所述步驟(2)中，采用2,3-二氫-3-羥基鄰氨基苯甲酸合酶催化氨基脫氧異分支酸脫去丙酮酸部分生成2,3-二氫-3-羥基鄰氨基苯甲酸；

所述步驟(3)中，采用DHHA-2,3-脫氫酶催化2,3-二氫-3-羥基鄰氨基苯甲酸脫氫生成3-羥基鄰氨基苯甲酸；

所述步驟(4)中，采用3-羥基鄰氨基苯甲酸-3,4-雙加氧酶催化3-羥基鄰氨基苯甲酸氧化開環(huán)重排反應生成喹啉酸。

2.一種煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的合成方法，包括如下步驟：

(I)按照權利要求1所述的方法制備得到煙酰胺腺嘌呤二核苷酸；

(Ⅱ)煙酰胺腺嘌呤二核苷酸在煙酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶催化下與ATP反應生成煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸。

3.一種合成喹啉酸的方法，包括如下步驟：

(1)以分支酸為起始物，經(jīng)過轉氨重排反應生成氨基脫氧異分支酸；

(2)氨基脫氧異分支酸脫去丙酮酸部分生成2,3-二氫-3-羥基鄰氨基苯甲酸；

(3)2,3-二氫-3-羥基鄰氨基苯甲酸脫氫生成3-羥基鄰氨基苯甲酸；

(4)3-羥基鄰氨基苯甲酸通過氧化開環(huán)重排反應生成喹啉酸；

所述步驟(1)中，采用2-氨基-4-脫氧分支酸合酶催化分支酸轉氨重排生成氨基脫氧異分支酸；

所述步驟(2)中，采用2,3-二氫-3-羥基鄰氨基苯甲酸合酶催化氨基脫氧異分支酸脫去丙酮酸部分生成2,3-二氫-3-羥基鄰氨基苯甲酸；

所述步驟(3)中，采用DHHA-2,3-脫氫酶催化2,3-二氫-3-羥基鄰氨基苯甲酸脫氫生成3-羥基鄰氨基苯甲酸；

所述步驟(4)中，采用3-羥基鄰氨基苯甲酸-3,4-雙加氧酶催化3-羥基鄰氨基苯甲酸氧化開環(huán)重排反應生成喹啉酸。

4.如權利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述DHHA-2,3-脫氫酶為脫氫酶A或脫氫酶B或脫氫酶C或脫氫酶D或脫氫酶E或脫氫酶F或脫氫酶G；

所述脫氫酶A是由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；

所述脫氫酶B是由序列表中序列11所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；

所述脫氫酶C是由序列表中序列12所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；

所述脫氫酶D是由序列表中序列13所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；

所述脫氫酶E是由序列表中序列14所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；

所述脫氫酶F是由序列表中序列15所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；

所述脫氫酶G是由序列表中序列16所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)。

5.權利要求1中所述的2-氨基-4-脫氧分支酸合酶、2,3-二氫-3-羥基鄰氨基苯甲酸合酶、DHHA-2,3-脫氫酶和3-羥基鄰氨基苯甲酸-3,4-雙加氧酶在煙酰胺腺嘌呤二核苷酸類化合物合成中的應用。