[發明專利]牛及其早期胚胎性別鑒定的體系、方法及試劑盒在審
| 申請號： | 201810604092.2 | 申請日： | 2018-06-13 |
| 公開（公告）號： | CN108796059A | 公開（公告）日： | 2018-11-13 |
| 發明（設計）人： | 張國君;馮春濤;楊宇澤;余文莉;李樹靜;王慧;劉杰;陳初光 | 申請（專利權）人： | 北京閱微基因技術有限公司;石家莊天泉良種奶牛有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6879 | 分類號： | C12Q1/6879;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 北京兆君聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 11333 | 代理人： | 胡敬紅 |
| 地址： | 100044 北京市海淀*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 探針 引物 早期胚胎性別 試劑盒 公牛 鑒別 牛早期胚胎 特異性基因 蛋白基因 復合檢測 檢測領域 探針組合 樣本處理 巢式PCR 多重PCR 檢出率 可檢測 靈敏度 有效地 再利用 折疊 準確率 構建 兩組 胚胎 樣本 生物技術 物種 細胞 檢測 污染 成功 | ||
1.牛及其早期胚胎性別鑒定的PCR體系，其特征在于：PCR體系中包含有下列引物及探針，
內標引物NB2-F：CGGGACTGGACTGGGAT，
內標引物NB2-R：CTGACTCTACGACTGTCT，
內標探針NB2-P：CCTCGCATGCAGCT；
性別位點SRY基因引物BOV97M-F：AACCAGTGGCTAGCAGCATCAA，
性別位點SRY基因引物BOV97M-R：TTAGGAATCT ATATTGCAGCTT，
性別位點SRY基因探針BOV97M-P：CTGCTCGATAGCAACC。
2.根據權利要求1所述的PCR體系，為熒光定量PCR體系，在探針上連接有熒光標記：
內標探針NB2-P：FAM-CCTCGCATGCAGCT-MGB；
性別位點SRY基因探針BOV97M-P：FAM-CTGCTCGATAGCAACC-MGB。
3.根據權利要求2所述的PCR體系，所述熒光定量PCR體系總體積為15μL，其中5.2ul的mix+ROX,1.2ul的引物及探針混合物、5.6ul的待測DNA，和3ul的水。
4.根據權利要求3所述的PCR體系，其中其中引物NB2-F：引物NB2-R：探針NB2-P：引物BOV97M-F：引物BOV97M-R：探針BOV97M-P的用量為1:1:1.25:1:1:25。
5.牛及其早期胚胎性別鑒定的PCR方法，包括檢測步驟和判定步驟，其中檢測步驟包括將權利要求1-4所述的PCR體系進行PCR擴增。
6.根據權利要求5所述的PCR方法，所述PCR擴增的反應程序為：95℃3min；然后95℃30S，58℃40S，循環45次。
7.根據權利要求6所述的PCR方法，所述PCR擴增為熒光定量PCR擴增。
8.根據權利要求7所述的PCR方法，所述判定步驟為：只有兩組引物及探針均有擴增及CT值符合標準的情況下為雄性胚胎；內標引物及探針擴增及CT值符合標準，而性別位點無擴增的情況下為雌性胚胎。
9.一種牛及其早期胚胎性別鑒定的試劑盒，包含有權利要求1-4所述的PCR體系。
10.權利要求1-4所述的PCR體系及權利要求8所述的試劑盒在牛及其早期胚胎性別鑒定中的應用。
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