[發明專利]用于檢測人細胞色素P450相關基因多態性的引物組、試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 201810579616.7
• 申請日: 2018-06-07
• 公開（公告）號: CN108841948A
• 公開（公告）日: 2018-11-20
• 發明（設計）人: 楊璐平;林志鏗;王松林;雷洋
• 申請（專利權）人: 廈門為正生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 廈門市新華專利商標代理有限公司 35203
• 代理人: 周學玲

本發明公開一種用于檢測人細胞色素P450相關基因多態性的引物組，所述引物組包括針對CYP2C19*2、CYP2C19*3、CYP3A4*18、CYP2C9*3、CYP2D6*10及CYP3A5*3基因位點的特異性引物及探針；本發明還涉及一種用于人細胞色素P450相關基因多態性位點檢測的試劑盒，所述試劑盒包括含有上述引物及探針的PCR反應液凍干粉(PCR buffer、dNTPs、MgCl2、UNG酶及Taq酶、海藻糖)。本發明還涉及一種用于人細胞色素P450相關基因多態性位點檢測的方法，該方法免去抽提DNA程序，直接采用微量全血擴增，用血量少，減少病人的痛苦；省時省力，并且大大減少經濟支出。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種用于檢測人細胞色素P450 相關的基因多態位點的引物組、試劑盒及其檢測方法。

背景技術

藥物進入人體后，會經過吸收、分布、代謝、排泄四個過程。肝臟 是人體中代謝藥物最重要的臟器，而主要的代謝酶是細胞色素P450超家 族(CYP)，它們催化多種內、外源物質(包括大多數臨床藥物)的代 謝，參與人體內一半以上的藥物代謝過程。由單個核苷酸變異引起的 DNA序列多態性稱之為單核苷酸多態性。P450代謝酶的單核苷酸多態 性是導致人類代謝和反應差異的關鍵因素。P450酶系的基因主要有 CYP1、CYP2、CYP3三個家族，相關的有以下幾種重要的P450酶： CYP1A2、CYP2A6、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4、CYP3A5。

CYP2C19參與氯吡格雷、S-美芬妥英、奧美拉唑、伏立康唑、安定、 去甲安定等藥物的代謝。CYP2C19遺傳變異可導致酶活性的個體差異， 使人群出現超快代謝者(ultrarapidmetabolizer，UM)、快代謝者(extensive metabolizer，EM)、中間代謝者(intermediatemetabolizer，IM)和慢代 謝者(poor metabolizer，PM)4種表型。CYP2C19*2(rs4244285，c.681G>A) 和CYP2C19*3(rs4986893，c.636G>A)是中國人群中存在的2種導致 CYP2C19酶缺陷的主要等位基因。CYP2C19*2導致剪接缺失， CYP2C19*3為終止密碼子突變。EM個體只攜帶CYP2C19*1等位基因，IM個體攜帶CYP2C19*2或CYP2C19*3雜合子基因型；PM個體包括CYP2C19*2/*2、CYP2C19*2/*3和CYP2C19*3/*3基因型。東方人群中 75～85％的PM由CYP2C19*2所致，約20～25％的PM由CYP2C19*3 所致。

CYP2D6又稱異喹胍4’-羥化酶,CYP第二亞家族中的重要成員。人 群中CYP2D6的活性呈現強代謝者(EM)、中間代謝者(IM)、弱代 謝者(PM)和超強代謝者(UM)四態分布的現象。白種人群中CYP2D6 PM的發生率高達5～10％，而在東方人群中PM的發生率約為1％。目前 已發現了CYP2D6基因的70多種遺傳變異。不同突變類型對酶活性和藥 物代謝的影響不一。中國人群中CYP2D6常見的導致酶活性降低的等位 基因包括CYP2D6*3(A2637deletion)、CYP2D6*4(G1934A)、CYP2D6*5 (CYP2D6deletion)和CYP2D6*10(C188T)，等位基因頻率分別為1 ％、1％、6％和53％。其中，CYP2D6*5為基因缺失多態，導致PM表 型；CYP2D6*10為該酶第34位脯氨酸被絲氨酸所替代所致，導致IM表 型。導致CYP2D6酶活性缺失的多態性可影響安替比林、可待因、β受 體阻滯劑如美托洛爾和卡維地洛、氯丙咪嗪、去甲替林、地昔帕明、多 慮平、丙咪嗪、馬普替林、奧匹哌醇、三甲丙咪嗪、昂丹司瓊、曲馬多和他莫昔芬等的體內代謝，從而影響這些藥物的療效和不良反應的發生， 臨床需根據個體的基因型進行劑量的調整。