[發明專利]一種針對GC33-3-1抗體具有特異性識別的熒光探針的合成以及應用

在審

• 申請號: 201810577436.5
• 申請日: 2018-06-07
• 公開（公告）號: CN108864052A
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發明（設計）人: 柯方;巫小文;許建華;林巧發;涂書清;陳艷;王津
• 申請（專利權）人: 福建醫科大學
• 主分類號: C07D401/14
• 分類號: C07D401/14;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 王義星

本發明公開一種針對GC33?3?1抗體具有特異性識別的熒光探針的合成以及應用。該探針合成路線簡單，反應條件溫和，后處理簡單方便。該熒光探針標記人血清蛋白（HSA）后熒光強度大大增強，熒光探針標記HSA后再將其用于識別GC33?3?1抗體。與其他檢測抗體的方法相比，該方法具有操作簡便，響應靈敏，以及具有選擇性等優點，在生物領域有較好的應用前景；。

技術領域

本發明屬于生物分析檢測領域，具體涉及一種用于特異性識別GC33-3-1抗體熒光探針的合成及其應用。

背景技術

人血清蛋白（HSA）是血清中最豐富的蛋白質，也是最重要的藥物載體蛋白。它對于許多內源性和外源性脂質的轉運，分布和代謝，包括脂肪酸，氨基酸，金屬離子和許多藥物，并且對血液的混合滲透壓有著中重要的作用。人血清白蛋白（HSA）是一種高分子量血漿蛋白。它是由585個氨基酸組成的單一鏈。像其他哺乳動物白蛋白一樣，人體白蛋白含有17個二硫橋和一個游離硫醇Cys34。在大多數情況下，蛋白質與藥物的相互結合作用會顯著影響藥物的表觀分布容積，也會影響藥物的清除率。因此，藥物與蛋白結合的研究可以提供有關藥物結構特征的信息，確定藥物的治療效果，在化學和臨床研究領域研究藥物與血清白蛋白的相互作用都是非常重要的。

Glypican-3（GCP3）是細胞膜表面糖蛋白，屬于 glypican 家族中的一種，是肝細胞癌（Heptocellular carcinoma，HCC）表面特異性標志物。GCP3在HCC中會高度表達，在正常的肝組織中無表達，所以GCP3可以作為肝癌治療的理想標志物。GCP3功能的缺失會導致過度生長和畸變（Simpson-Golabi-Behmel）綜合征，這是一種X染色體異常的疾病。GCP3缺失小鼠表現出過度生長和一些畸變的表型。在小鼠中GCP3過表達會抑制肝細胞增殖和肝的再生。GC33-3-1抗體是高親和力抗GCP3抗體，具有很強的抗腫瘤活性。因此，通過合成苯并咪唑酮類熒光探針標記人血清蛋白（HSA），再識別GC33-3-1抗體，從而檢測到人體內的肝癌細胞。該熒光探針具有靈敏度高，選擇性好，操作簡單等優點。

發明內容

本發明的目的之一是提供一種用于特異性識別GC33-3-1抗體的熒光探針，該熒光探針與超純水溶液、Tris-HCl溶液按照1：1：1的比例配成混合溶液時熒光信號較微弱，當該熒光探針與人血清蛋白溶液、Tris-HCl溶液按照1：1：1的比例配成混合溶液熒光信號明顯增強。

本發明的目的之一提供一種可用于特異性識別GC33-3-1抗體的熒光探針的合成方法和應用，該方法具有操作方便，原料易得，提純簡單等優點。

本發明所有的技術方案為：

本發明提供了一種可用于特異性識別GC33-3-1抗體的熒光探針，該探針的結構式如下：

本發明提供了所述熒光探針的制備方法，該方法步驟如下：

具體合成步驟如下：

（1）中間體化合物F1的合成

將4,6-二氯嘧啶和鄰苯二胺溶于異丙醇中，并向該反應液中加入N,N-二異丙基乙胺，將反應液加入微波反應中，150℃反應10 min，減壓除去異丙醇，得化合物F1。

（2）中間體化合物F2的合成

將化合物F1和羰基-2-咪唑溶于四氫呋喃溶液中，加入吡啶作催化劑，在氮氣保護下65℃油浴回流，過夜，減壓除去溶劑，經硅膠柱分離，得化合物F2。

（3）熒光探針F3的合成