[發明專利]適配體選擇方法及以適配體純化生物分子的方法

在審

• 申請號: 201810563602.6
• 申請日: 2018-06-04
• 公開（公告）號: CN110551724A
• 公開（公告）日: 2019-12-10
• 發明（設計）人: 洪振義;洪姮娥
• 申請（專利權）人: 洪振義;洪姮娥
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;C12N15/10;G01N33/53;G01N33/574
• 代理公司: 11205 北京同立鈞成知識產權代理有限公司
• 代理人: 羅英;臧建明

本發明提出了使用核酸適配體和疾病患者檢體中與疾病相關的某些特定生物分子的結合以從疾病患者檢體中純化出特定生物分子并進行鑒定來發現特定疾病的生物標記物的方法。本發明描述了以磁性輔助適配體快速選擇(MARAS)從核酸庫中篩選出對與疾病相關的某些特定生物分子具有高結合親和力且不結合于其他非疾病相關的生物分子的適配體的方法。同時，本發明也提出使用上述獲得的核酸適配體作為捕獲配體，以從疾病患者檢體中純化出疾病相關的某些特定生物分子的方法。進一步地，本發明描述了以施加振蕩磁場的磁場范圍作為虛擬過濾器進而從樣品中純化出和作為捕獲配體的適配體具特定結合親和力范圍的生物分子。

技術領域

本發明大體上涉及一種利用陽性和陰性篩選的設計以及核酸庫中的結構多樣性找出陽性 檢體(疾病病患的檢體)和陰性檢體(非疾病病患的檢體)中的差異，并使用以磁性輔助適配體快 速選擇(MARAS)方法篩選出具分辨二者差異性能力的適配體(aptamer)的方法，進而使用所篩 選出的適配體作為捕獲配體以從陽性屬性樣品中純化出與適配體結合的疾病相關的某些生物 分子并進行鑒定以發現疾病相關的生物標記物(biomarker)的方法。具體地說，本發明涉及一種 從核酸庫中篩選出具有分辨疾病患者與非患者檢體中所含生物分子的差異的能力，且可用來 作為能從疾病患者檢體中純化出此差異性的疾病相關的生物分子的捕獲配體(capture ligand)的 適配體的篩選方法，同時描述以此適配體作為捕獲配體從疾病患者檢體中純化出此差異性的 疾病相關的生物分子的方法。

背景技術

自總蛋白質(total protein)中純化目標蛋白進而鑒定目標蛋白的身分，必須仰賴合適的蛋 白質純化技術，將目標蛋白從總蛋白質中分離出來，以利進行后續分析。常見的蛋白質純化 技術有:(1)薄膜分離法(Membrane separation)大部分過程系利用蛋白質的分子大小來達到分 離的目的；(2)層析法(Chromatography)利用蛋白質的分子大小、電荷、極性與親和力的差異， 又分為:膠體過濾(Gel Filtration)、離子交換層析法(Ion-Exchange Chromatography)、疏水性作 用層析法(Hydrophobic InteractionChromatography、HIC)、親和性層析法(Affinity Chromatography)、分配層析法(Partition Chromatography)、高效能(高壓)液相層析法 (High-Performance(Pressure)Liquid Chromatography)；以及(3)磁性分離法(Magnetic separation) 利用本身磁性的特性，將可與目標蛋白質具有專一性結合的分子(DNA、抗體、勝肽)，固定在 磁性粒子表面與目標蛋白結合后，通過磁性分離，使用磁鐵便能快速達到將目標蛋白從總蛋 白質中分離的效果。上述(1)以及(2)的蛋白純化方式在當目標蛋白分子量與非目標蛋白分子量 大小相近時，兩者都會被分離出來，造成目標蛋白與非目標蛋白混合在一起，導致純度降低， 如薄膜分離多作為初步純化分離蛋白質的方法；而(3)磁性分離法雖可快速將目標蛋白從總蛋 白質中分離出來，但為了將目標蛋白從磁珠上脫附，通常使用高濃度鹽類沖提(elution)，沖提 步驟耗費時間且可能造成蛋白活性下降，且磁性分離法常需以抗體作為與蛋白質結合的工具， 抗體成本高、保存不易且效價不一，造成蛋白純化成本過高而不易推廣于實際上使用。