[發(fā)明專利]一種檢測黃樟素的試紙條及其制備方法和應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810540551.5
• 申請日: 2018-05-30
• 公開（公告）號: CN108931646B
• 公開（公告）日: 2021-04-27
• 發(fā)明（設計）人: 陳黎;劉惠民;趙樂;崔華鵬;樊美娟;聶聰;張曉兵;謝復煒;潘立寧;王曉瑜
• 申請（專利權(quán)）人: 中國煙草總公司鄭州煙草研究院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/532
• 代理公司: 鄭州中民專利代理有限公司 41110
• 代理人: 姜振東

本發(fā)明提供一種檢測黃樟素的試紙條及其制備方法和應用。該試紙條包括樣品吸收墊、結(jié)合物釋放墊、反應膜、吸水墊和底板；其中，所述反應膜上具有包被有黃樟素半抗原?載體蛋白偶聯(lián)物的檢測線和包被有羊抗鼠抗抗體的質(zhì)控線，所述結(jié)合物釋放墊上噴涂有黃樟素單克隆抗體?膠體金標記物，所述黃樟素半抗原是由5?(2?溴?2?丙烯?1?基)?1,3?苯并二氧戊環(huán)與氨基丙酸反應得到的。本發(fā)明還提供了黃樟素試紙條的制備方法及應用上述試紙條檢測樣品中黃樟素的方法。本發(fā)明提供的試紙條和檢測方法具有操作簡單、靈敏度高、檢測速度快、成本低、不受檢測設備限制的優(yōu)點，能夠?qū)崿F(xiàn)對大批量樣品中的黃樟素進行快速檢測和現(xiàn)場監(jiān)控。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測黃樟素的試紙條及其制備方法和應用，具體涉及一種用于檢測黃樟素的膠體金試紙條，其特別適用于煙用香精香料、煙草及煙草制品中黃樟素的檢測。

背景技術(shù)

黃樟素又稱黃樟油素、黃樟腦，無色或微黃色液體，不溶于水，易溶于氯仿、乙醚和其他非極性有機溶劑，有樟木氣味，天然存在于肉桂、肉豆蔻、黑胡椒和紫蘇等植物中，是許多食用天然精油如黃樟精油、八角精油和樟腦油的主要成分。由于其舒適的氣味，黃樟油曾經(jīng)在食品、洗滌用品和化妝品中作為調(diào)味劑和調(diào)香劑。黃樟素類化合物主要包括黃樟素、異黃樟素、二氫黃樟素等。黃樟素也是非法生產(chǎn)毒品搖頭丸的一個重要組成部分。由于試驗表明黃樟素對老鼠有致肝腫瘤的效果，因此，各國對黃樟素進行了限量規(guī)定。2001年，歐盟委員會規(guī)定黃樟素和異黃樟素的總使用限量，食品和飲料中為1 mg/kg，含酒精飲料為5 mg/kg。2005年，歐洲委員會將黃樟素列為懷疑弱致癌物質(zhì)，雖然沒有規(guī)定每日限量，但要求設置的盡可能低。我國于2005年實施的《易制毒化學品管理條例》將黃樟素列為第一類易制毒化學品。煙用香精香料在生產(chǎn)制造過程中有可能由天然植物精油引入黃樟素，進而通過煙絲中添加的香精香料存在于煙草制品中，對消費者的健康造成潛在危害。因此，建立黃樟素的快速檢測方法，對香精香料及煙草制品進行質(zhì)量控制十分必要。

目前，黃樟素主要通過直接萃取法、超聲萃取法、同時蒸餾萃取法、水蒸氣蒸餾法等提取，結(jié)合氣相色譜法（GC）、氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS/MS）、高效液相色譜法（HPLC）、超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）檢測。儀器分析方法雖可以實現(xiàn)準確定性定量，但需要復雜昂貴的儀器設備及專業(yè)操作人員，加之樣品前處理繁瑣費時、檢測費用高，難以滿足現(xiàn)場監(jiān)控和大量樣本篩查的需要。因此，開發(fā)一種不受檢測設備限制并且能夠?qū)崿F(xiàn)對大批量樣品進行快速檢測的產(chǎn)品和方法成為迫切需要解決的問題。截至目前，與煙用香精香料及煙草中黃樟素檢測相關(guān)的專利和文獻報道較少，市場上尚未有黃樟素試紙條出現(xiàn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的正是基于上述現(xiàn)有技術(shù)狀況提供一種檢測黃樟素的試紙條及其制備方法和應用，本發(fā)明應用膠體金免疫層析法測定煙用香精香料及煙草制品中的黃樟素，具有準確度高、操作簡單、無需專業(yè)人員操作、無需配套其他檢測設備、方便攜帶檢測、時間短、檢測成本低等特點，適用于現(xiàn)場大量樣品的篩查。

為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供了一種檢測黃樟素的試紙條，該試紙條包括樣品吸收墊、結(jié)合物釋放墊、反應膜、吸水墊和底板；其中，所述反應膜上具有包被有黃樟素半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物的檢測線和包被有羊抗鼠抗抗體的質(zhì)控線，所述結(jié)合物釋放墊上噴涂有黃樟素單克隆抗體-膠體金標記物；所述黃樟素單克隆抗體是以黃樟素半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物作為免疫原制備獲得。所述黃樟素半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物由黃樟素半抗原與載體蛋白偶聯(lián)得到，所述載體蛋白為牛血清白蛋白、卵清蛋白、鑰孔血藍蛋白或人血清白蛋白，所述黃樟素半抗原是由5-(2-溴-2-丙烯-1-基)-1,3-苯并二氧戊環(huán)與氨基丙酸反應得到的，其分子結(jié)構(gòu)式為：

所述黃樟素半抗原的制備方法如下：