[發明專利]高產奶性能娟姍奶牛選育方法

有效

• 申請號: 201810536719.5
• 申請日: 2018-05-30
• 公開（公告）號: CN108823320B
• 公開（公告）日: 2022-03-08
• 發明（設計）人: 黃明光;梁金逢;周曉情;肖正中;吳柱月;朱文;方治山;文信旺;彭夏云;潘銳
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區畜牧研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858
• 代理公司: 北京天奇智新知識產權代理有限公司 11340
• 代理人: 韋玲雙

1.高產奶性能娟姍奶牛選育方法，其特征在于：包括以下步驟：

用標記引物S11，序列為GTAGACCCGT，擴增娟姍奶牛血液中的線粒體DNA，如果能夠擴增出929bp片段或478bp片段，則標志著該娟姍奶牛為高產奶的娟姍奶牛；或

用標記引物S1110，序列為CAGACCGACC，擴增娟姍奶牛血液中的線粒體DNA，如果能夠擴增出458bp片段，則標志著該娟姍奶牛為低產奶的娟姍奶牛；或

用標記引物S1120，序列為ACCAACCAGG，擴增娟姍奶牛血液中的線粒體DNA，如果能夠擴增出669bp片段，則標志著該娟姍奶牛為低產奶的娟姍奶牛；

所述高產奶的娟姍奶牛是指305 d 產奶量4000 kg的娟姍奶牛，所述低產奶的娟姍奶牛是指305 d 產奶量 3200kg的娟姍奶牛；

所述的標記引物是由以下方法篩選得到的：

（1）、取20頭高產奶和 20 頭低產奶的娟姍奶牛，頸靜脈采血 10 mL ，EDTA-k2 抗凝，-20 ℃保存；

（2）、用 DNA 提取試劑盒提取奶牛血液總 DNA 進行電泳檢測，并用紫外分光光度計檢測奶牛個體的 DNA 濃度，稀釋到同一濃度；取每個個體等量DNA分別混成高產奶娟姍奶牛DNA 池和低產奶娟姍奶牛DNA池；

（3）、用250條 S 系列 10 bp 隨機引物，分別以高產奶和低產奶娟姍奶牛DNA 池為模板進行 PCR 擴增，PCR 擴增反應體系為Template 0.5μl，其中，10×Buffer 2.5μl，各2.5mM dNTP共1μl，酶0.2μl，引物1μl，加雙蒸H₂O 至25μl；

所述10×Buffer含有 Mg²⁺；所述Template為 20-50ng/μl的基因組DNA ；

PCR 擴增反應程序為：94 ℃預變性4 min；94 ℃變性45s；36 ℃退火45s；72℃延伸1min，35個循環后，72 ℃延伸 10min；

PCR 擴增產物在1.2% 的瓊脂糖凝膠電泳，電壓為 5V/cm ，電泳緩沖液為 0.5×TBE，電泳1～2h后在凝膠成像系統上檢測并拍照，從中篩選擴增條帶多、重復性好、分辨率高且擴增條帶在高產奶和低產奶娟姍奶牛 DNA 池間有顯著差異的3個引物；經DNA 片段的回收、連接、感受態的制備、轉化、質粒 DNA 的提取及重組質粒的酶切鑒定后，進行測序；

其中，高產奶娟姍奶牛 DNA 池中有1個929bp或478bp的RAPD 標記片段，其標記引物為S11；

低產奶娟姍奶牛 DNA 池中有1個458bp片段的RAPD 標記片段，其標記引物為S1110；

低產奶娟姍奶牛 DNA 池中有1個669bp片段的RAPD 標記片段，其標記引物為S1120。

2.根據權利要求1所述的高產奶性能娟姍奶牛選育方法，其特征在于：929bp片段的RAPD 標記片段的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示，478bp的RAPD 標記片段的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示。

3.根據權利要求1所述的高產奶性能娟姍奶牛選育方法，其特征在于：458bp片段的RAPD 標記片段的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示。

4.根據權利要求1所述的高產奶性能娟姍奶牛選育方法，其特征在于：669bp片段的RAPD 標記片段的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示。