[發明專利]一種AML1-ETO融合基因檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201810535302.7
• 申請日: 2018-05-22
• 公開（公告）號: CN108690879B
• 公開（公告）日: 2022-02-22
• 發明（設計）人: 許嘉森;吳詩揚;劉志明;朱蓉;彭璨璨
• 申請（專利權）人: 益善生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 宋靜娜;郝傳鑫

本發明公開了一種基因探針穩定劑，包含以下組分：檸檬酸鈉、NaCl、硫酸葡聚糖、去離子甲酰胺、Tris?HCl、EDTA、甜菜堿和聚乙烯基吡咯烷酮。本發明還公開了所述基因探針穩定劑的用途及含有所述基因探針穩定劑的AML1?ETO融合基因檢測試劑盒。本發明提供的基因探針穩定劑可有效防止探針在存放過程中降解，延長其保存期，提高試劑盒的耐存儲性，且能確保檢測結果的可靠性，避免出現假陰性結果。本發明含所述基因探針穩定劑的AML1?ETO融合基因檢測試劑盒穩定性好、靈敏度和特異性高，檢測結果準確可靠。

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，具體涉及一種基因探針穩定劑及含有該探針穩定劑的AML1-ETO融合基因檢測試劑盒。

背景技術

AML1-ETO融合基因也是AML的一個診斷指標，同時也是預后良好的一個預后指標。急性粒細胞白血病(acute myeloid leukemia，AML)，主要表現為粒系原始細胞的惡性增殖，它有兩個亞型：粒細胞白血病未分化型(M1)與粒細胞白血病部分分化型(M2)。文獻報道l2％-20％的急性粒細胞白血病(AML)存在t(8；21)(q22；q22)染色體易位，尤其在AML-M2，其發生率可高達40％-80％。

位于染色體21q22的AML1基因與8q22的ETO基因融合，產生AML1-ETO和ETO-AML1融合基因，一般認為表達量極低或者由于降解導致表達不穩定，故現階段的研究多集中AML1-ETO融合基因。AML1基因又稱RUNX1基因，含12個外顯子，全長超過260kb，其斷裂點80-90％位于內含子1，其余則發生在內含子2。AML1-ETO融合蛋白是一種轉錄抑制因子，可抑制正常AML1蛋白介導的功能，改變造血祖細胞自我更新及成熟過程，同時也產生啟動異常造血細胞增殖的信號，引起白血病細胞生長。臨床上t(8；21)(q22；q22)白血病好發于青年和兒童(5％～10％)，主要與M2型密切相關，并且年齡越小發生率越高。AML1-ETO融合基因陽性是患者預后好的標志，其完全緩解(CR)率可達90％，5年長期無病生存率(event-freesurvival，EFS)可達50％-70％，經化療或BMT后大部分病人可在短期內轉為陰性，但仍有轉陽性的可能，及時治療可再次轉陰性，由陰性轉陽性或持續陽性可能預示復發。因此，AML1/ETO融合基因的檢測對患者M2診斷分型、預后評估及復發監測具有重要的意義。

目前AML1-ETO融合基因的檢測方法主要包括以下3種：細胞遺傳學檢測、基于PCR方法的檢測和FISH檢測。細胞遺傳學檢測需培養細胞，耗時較長，只能檢測中期的細胞，且成功率和靈敏度低；基于PCR的檢測如RT-PCR、Q-PCR等易污染，假陽性率高，只能檢測已知的斷裂點，對未知或含少量轉錄本的AML1-ETO融合基因無法檢出。FISH檢測對病人外周血或骨髓的AML1-ETO融合基因具有極高的靈敏度和檢測隱匿型易位的能力，其假陽性率遠遠低于PCR檢測，能提供相對于核型分析更為可靠的分子遺傳學證據，可用于預后判斷、用藥療效、微小病灶殘留及移植術后效果的監測。雖然，目前FISH檢測方法得到了廣泛的應用和改良，但目前基于FISH法的檢測AML1-ETO融合基因檢測中的探針條數多，混合存放時，易降解，導致檢測結果的不穩定性，尤其容易出現假陰性檢測結果，大大影響了檢測結果的準確率和可信度。

為了保證試劑盒的穩定性，特別是在長途運輸過程中由于環境溫度的不穩定和路途顛簸等影響下還能保證良好的穩定性。目前急需開發出一種添加探針穩定劑的預混熒光探針工作液，可以在沒有降解或副反應的情況下保存以簡化所需操作，極大降低對使用者和使用環境的要求，提供便利，但與此同時，對試劑盒的穩定性提出了更高要求，增加了保證其溶液穩定性的難度，鑒于此，提出發明。

發明內容

基于此，本發明的目的在于克服上述現有技術的不足之處而提供一種基因探針穩定劑，可有效防止基因探針在存放過程中降解，延長其保存期，提高試劑盒的耐存儲性，且能確保檢測結果的可靠性。