[發明專利]棉花遺傳轉化中產生正常苗的培養基及方法有效
| 申請號： | 201810532108.3 | 申請日： | 2018-05-25 |
| 公開（公告）號： | CN110521590B | 公開（公告）日： | 2022-06-24 |
| 發明（設計）人： | 羅曉麗;肖娟麗;張安紅;王志安;劉傳亮;馬丹;孫瑞斌;劉志紅;王少輝 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院棉花研究所;山西省農業科學院棉花研究所 |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 李冉 |
| 地址： | 455000 河*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 棉花 遺傳 轉化 產生 正常 培養基 方法 | ||
1.棉花遺傳轉化中產生正常苗的培養方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1. 培育無菌苗，取無菌苗下胚軸切段；
S2. 制備浸染液；
S3. 使用浸染液侵染下胚軸切段，進行共培養；
S4. 對共培養后的下胚軸切段進行誘導篩選培養，獲得愈傷組織；
S5. 使用無激素的增殖培養基對誘導篩選培養后的愈傷組織進行增殖培養，至愈傷組織分化，形成胚性愈傷組織;
所述增殖培養基由如下組分組成：維生素B1 8-12 mg/L，葡萄糖28-32 g/L，Phytagel2.8-3.0 g/L和無機鹽，pH 6.8；其中，所述無機鹽為MS培養基中的無機鹽，并且無機鹽中的硝酸鉀濃度加倍；余量為水；
S6. 將胚性愈傷組織轉入分化培養基進行透氣培養，10-15 d繼代一次，連續繼代3-5次直至出現胚狀體；
所述分化培養基以所述增殖培養基為基礎，去掉無機鹽中的硝酸銨成分，添加天冬素0.45-0.55 g/L，谷氨酰銨0.8-1.2 g/L，并且Phytagel濃度為3.5-3.9 g/L，葡萄糖濃度為20-25 g/L；
S7. 胚狀體形成后降低培養基中糖含量，利用成苗培養基繼續繼代培養，得到再生植株；
所述成苗培養基以所述分化培養基為基礎，并且Phytagel濃度為3.2-3.3 g/L，葡萄糖濃度為15-25 g/L；
所述S3具體步驟如下：
使用浸染液浸染下胚軸切段5-10min，將浸染后的下胚軸切段放入共培養培養基上，22-24℃暗培養48h；
所述共培養培養基以所述增殖培養基為基礎，添加2,4-D 0.08-0.12 mg/L， KT 0.08-0.12 mg/L；
所述S4具體步驟如下：
S41. 經共培養后的下胚軸段放入第一篩選培養基中，培養2個月，獲得愈傷組織；
S42. 直徑1-2 cm的愈傷組織轉入第二篩選培養基中二次篩選培養1個月；小于1 cm的愈傷組織再次轉入第一篩選培養基中二次誘導篩選培養1個月；
所述第一篩選培養基以所述增殖培養基為基礎，添加2,4-D 0.08-0.12 mg/L，KT0.08-0.12 mg/L，卡那霉素90-110 mg/L，頭孢霉素450-550 mg/L；
所述第二篩選培養基以所述增殖培養基為基礎，添加卡那霉素90-110 mg/L，頭孢霉素450-550 mg/L。
2.根據權利要求1所述的棉花遺傳轉化中產生正常苗的培養方法，其特征在于，所述S5中25d繼代一次，連續繼代2-3次，直到愈傷組織分化。
3.根據權利要求1所述的棉花遺傳轉化中產生正常苗的培養方法，其特征在于，所述S7中再生植株生長至5-8 cm后即可作為接穗嫁接到砧木苗上。
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