[發明專利]一種普魯卡因胺免疫檢測試劑及其制備和檢測方法

在審

• 申請號: 201810484515.1
• 申請日: 2018-05-23
• 公開（公告）號: CN108761062A
• 公開（公告）日: 2018-11-06
• 發明（設計）人: 李瑤;劉麗青;胡雪婷;曹晶
• 申請（專利權）人: 太原瑞盛生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535;G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種普魯卡因胺免疫檢測試劑及其制備和檢測方法。包括：酶標普魯卡因胺、用于檢測普魯卡因胺抗體?酶標普魯卡因胺復合物的指示試劑；上述酶標普魯卡因胺由普魯卡因胺和葡萄糖脫氫酶偶聯而成。本發明的普魯卡因胺免疫檢測試劑可以精確快速地確定人體血液等樣品中普魯卡因胺含量。與市場上現有的檢測試劑相比，本發明檢測試劑具有方便快速、靈敏度高、特異性強、定量準確等優點，有利于臨床的推廣使用。

技術領域

本發明涉及醫學檢驗領域，具體是一種普魯卡因胺免疫檢測試劑及其制備和檢測方法。

背景技術

普魯卡因胺（Procainamide）是一種應用多年的Ia類抗心律失常藥物，其抗心律失常的作用主要在于減慢心肌的電傳導，延長心肌組織的復極時間，作用的電生理機理為抑制Na⁺、K⁺、Ca²⁺通道。普魯卡因胺對心室復極的影響通常表現為動作電位時程和有效不應期的延長，穩定心肌細胞膜，降低應激性及傳導性，抑制心肌自律性。用奎尼丁無效患者用本品可能有效。研究表明，普魯卡因胺還具有抑制血小板聚集作用。但是，大劑量口服出現惡心、嘔吐、腹瀉等胃腸道反應，長期用藥可導致系統性紅斑狼瘡樣綜合樣綜合征，患者出現抗DNA抗體陽性，用量過大還能導致血白細胞減少等。所以在有關食品等樣品中對普魯卡因胺進行快速、靈敏的測定很有必要。

目前檢測普魯卡因胺的常用方法有：高效液相色譜分析、分光光度法和毛細管電泳法等。其中，高效液相色譜分析費時且不易自動化，并且使用紫外檢測時需要衍生；分光光度法檢測結果準確度相對不高；毛細管電泳法靈敏度較低并且重現性較差。

本發明采用的方法為均相酶免疫檢測法，其優點為：操作簡便、快速、靈敏度高、準確性好、適合于自動化，應用廣泛，并且用全自動生化分析儀對小分子物質和大分子物質都能高通量快速測定。

發明內容

本發明的目的在于解決現有技術中普魯卡因胺檢測過程操作復雜、以及測定準確度低的問題，本發明提供了一種快速、靈敏度高、準確檢測出待測樣本中普魯卡因胺含量的普魯卡因胺均相酶免疫檢測試劑及其制備方法。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種普魯卡因胺免疫檢測試劑及其制備和檢測方法，其特征在于：酶標普魯卡因胺、用于檢測普魯卡因胺抗體-酶標普魯卡因胺復合物的指示試劑；上述酶標普魯卡因胺由普魯卡因胺和葡萄糖脫氫酶偶聯而成。

作為本發明進一步的方案，所述指示試劑選自酶試劑，包括：酶標偶聯物和酶的底物；上述酶標偶聯物包括葡萄糖脫氫酶-普魯卡因胺偶聯物；上述酶的底物為葡萄糖。

作為本發明進一步的方案，所述的一種普魯卡因胺免疫檢測試劑及其制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）葡萄糖脫氫酶-普魯卡因胺偶聯物的制備：葡萄糖脫氫酶（GDH）與普魯卡因胺偶聯，純化偶聯的酶標抗原。

（2）普魯卡因胺均相酶免疫檢測試劑的制備：

試劑1的制備：由普魯卡因胺抗體和均相酶底物混合而成；

試劑2的制備：由葡萄糖脫氫酶-抗原偶聯物與磷酸鹽緩沖液混合而成。

作為本發明進一步的方案，所述的一種普魯卡因胺免疫檢測試劑的制備方法，其特征在于，所述的步驟（1）具體過程為：

1）葡萄糖脫氫酶（GDH）與普魯卡因胺的偶聯

a. 將5-30 mg普魯卡因胺溶于100-500 μL二甲基甲酰胺（DMF）中，輕微振蕩溶解；同時，取10-40 mg規格為100-300 KU的GDH溶解于PBS緩沖液中震蕩、均勻溶解。

b. 將普魯卡因胺溶液在攪拌下緩慢加入GDH溶液中，同時緩慢滴入10-40 μL戊二醛溶液，滴加完畢后將溶液置于4℃攪拌反應過夜。