[發明專利]一種普魯卡因胺免疫檢測試劑及其制備和檢測方法

在審

• 申請號: 201810484515.1
• 申請日: 2018-05-23
• 公開（公告）號: CN108761062A
• 公開（公告）日: 2018-11-06
• 發明（設計）人: 李瑤;劉麗青;胡雪婷;曹晶
• 申請（專利權）人: 太原瑞盛生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535;G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種普魯卡因胺免疫檢測試劑及其制備和檢測方法，其特征在于：酶標普魯卡因胺、用于檢測普魯卡因胺抗體-酶標普魯卡因胺復合物的指示試劑。

2.根據權利要求1所述的普魯卡因胺的免疫檢測試劑，其特征在于：所述酶標普魯卡因胺由普魯卡因胺和葡萄糖脫氫酶偶聯而成。

3.根據權利要求1所述的普魯卡因胺免疫檢測試劑，其特征在于：所述指示試劑選自酶試劑，包括：酶標偶聯物和酶的底物；上述酶標偶聯物包括葡萄糖脫氫酶-普魯卡因胺偶聯物；上述酶的底物為葡萄糖。

4.一種普魯卡因胺免疫檢測試劑及其制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）葡萄糖脫氫酶-普魯卡因胺偶聯物的制備：葡萄糖脫氫酶（GDH）與普魯卡因胺偶聯，純化偶聯的酶標抗原。

5.（2）普魯卡因胺均相酶免疫檢測試劑的制備：

試劑1的制備：由普魯卡因胺抗體和均相酶底物混合而成；

試劑2的制備：由葡萄糖脫氫酶-普魯卡因胺偶聯物與磷酸鹽緩沖液混合而成。

6.根據權利要求5所述的一種普魯卡因胺免疫檢測試劑的制備方法，其特征在于，所述的步驟（1）具體過程為：

1）葡萄糖脫氫酶（GDH）與普魯卡因胺的偶聯

a. 將5-30 mg普魯卡因胺溶于100-500 μL二甲基甲酰胺（DMF）中，輕微振蕩溶解；同時，取10-40 mg規格為100-300 KU的GDH溶解于PBS緩沖液中震蕩、均勻溶解。

7.b. 將普魯卡因胺溶液在攪拌下緩慢加入GDH溶液中，同時緩慢滴入10-40 μL戊二醛溶液，滴加完畢后將溶液置于4℃攪拌反應過夜。

8.2）純化偶聯的酶標抗原

通過G-25凝膠層析柱純化偶聯的酶標抗原，得到葡萄糖脫氫酶-普魯卡因胺偶聯物，于2-8℃下儲存。

9.根據權利要求5所述的一種普魯卡因胺免疫檢測試劑的制備方法，其特征在于，步驟（2）的具體過程如下：

試劑1的制備：將2-5 g氧化態的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD、0.5-3 g葡萄糖用0.5-2 L磷酸鹽緩沖液溶解制成均相酶底物；將普魯卡因胺抗體加到上述均相酶底物中，抗體與均相酶底物的體積比為1:100～1:10000；

試劑2的制備：將制備的葡萄糖脫氫酶-普魯卡因胺偶聯物加到磷酸鹽緩沖液中，上述偶聯物與磷酸鹽緩沖液的體積比為1:100～1:10000。

10.利用權利要求1至4任意一項所述的普魯卡因胺免疫檢測試劑的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）將待測樣本與普魯卡因胺抗體接觸；

2）根據待測樣本中普魯卡因胺與普魯卡因胺抗體的結合情況，利用指示試劑判斷樣本中普魯卡因胺的含量；所述待測樣本為血清、血漿、唾液或尿液。