[發明專利]一種樟屬及其近緣屬植物通用SSR分子標記及其開發方法和應用

有效

• 申請號: 201810475199.1
• 申請日: 2018-05-17
• 公開（公告）號: CN108642208B
• 公開（公告）日: 2022-01-18
• 發明（設計）人: 伍艷芳;徐海寧;劉新亮;鄭永杰;李江;楊海寬;汪信東;章挺;王建
• 申請（專利權）人: 江西省林業科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

1.一種樟屬、楠屬及潤楠屬植物通用的微衛星分子標記的特異性引物組，其特征在于，所述的特異性引物組由如下特異性引物組成：

特異性引物Cc-32：F：CGTCGGCAAAATAAAAGGAA，R：GACGAAAATGAAAACGTCGG；

特異性引物Cc-41：F：TGGGACCATCAAAAGGGTTA，R：GATTGTGGGTGGCTGTTAGG；

特異性引物Cc-72：F：GGCAGGTAATGAGTAATGACAGAA，R：AATAGGGGGAAAGGATTTGG；

特異性引物Cc-95：F：AGGGATGGTGCAAAGATGAC，R：AGCAGCTCACTCCACTTGGT；

特異性引物Cc-99：F：TGCCCATAAGAGAACCCACT，R：TTTTGCTTTCGTCCTGCTTT；

特異性引物Cc-126：F：ATTTGGATGGACCAAAGGTG，R：ATGGAGTCCTTGAAATCCCC；

特異性引物Cc-127：F：GCCCAACCCAAAATATTCTAA，R：CCCACAATGGTGTTGTGAAA；

特異性引物Cc-175：F：TCGGGTTAAAAAGGCTACGA，R：CTGGTTTGGGAGTCATTGGT。

2.權利要求1所述的樟屬、楠屬及潤楠屬植物通用的微衛星分子標記的特異性引物組的應用，其特征在于，所述的應用是用于開展遺傳多樣性分析。

3.權利要求1所述的樟屬、楠屬及潤楠屬植物通用微衛星分子標記的特異性引物組應用于遺傳多樣性檢測的方法，其特征在于，包括如下步驟：

a、提取待測植物的基因組DNA；

b、以步驟（a）提取的基因組DNA為模板，利用權利要求1所述的特異性引物組中的每個引物對分別進行PCR擴增；

c、利用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳對PCR擴增產物進行分型；

d、采用生物信息學軟件對基因分型數據進行統計分析。

4. 根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟（b）中的PCR擴增，其擴增體系為：10×buffer 1μl，25mmol/L MgCl₂ 0.6μl，10mmol/L dNTP 0.6μl，5U/μl DNA聚合酶0.1μl，DNA模板50ng，25mmol/L 微衛星分子標記的引物F和R各0.5μl，雙蒸水定容至10μl。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟（b）中的PCR擴增，其擴增反應程序為：94℃預變性4min；94℃變性30sec，各引物對退火溫度下復性30sec，72℃延伸30sec，32個循環；最后72℃延伸10min，4℃保存；

引物的退火溫度分別為Cc-32：55℃；Cc-41：58℃；Cc-72：58℃；Cc-95：58℃；Cc-99：54℃；Cc-126：56℃；Cc-127：52℃；Cc-175：58℃。

6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟（c）中的變性聚丙烯酰胺凝膠電泳是使用8%的凝膠濃度。