[發(fā)明專利]一種外泌體、外泌體的制備方法及其在制備皮膚淺表性腫瘤的藥物中的應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810475100.8 | 申請日： | 2018-05-17 |
| 公開（公告）號： | CN108587998B | 公開（公告）日： | 2021-05-18 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 彭麗華;褚陽 | 申請（專利權(quán)）人： | 浙江大學(xué) |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/70;A61K41/00;A61K38/17;A61K47/46;A61K47/42;A61P35/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200 | 代理人： | 邱啟旺 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 外泌體 制備 方法 及其 皮膚 淺表性 腫瘤 藥物 中的 應(yīng)用 | ||
1.一種外泌體，其特征在于，所述外泌體為由Trail基因轉(zhuǎn)染的大腸桿菌來源的外泌體，所述外泌體中還加入靶向黑色素瘤細(xì)胞的多肽iRGD和多肽PEP以及紅外光熱劑吲哚菁綠ICG，
其中多肽iRGD為棕櫚酸修飾的序列為CRGDRGPDC的氨基酸，PEP為棕櫚酸修飾的序列為KWRNMGGAGIVRRADRAAVV的氨基酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種外泌體，其特征在于，所述外泌體的制備方法包括如下步驟：
步驟（1）：用熱激法將含有Trail蛋白的質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌，然后進(jìn)行培養(yǎng)；
步驟（2）：收集步驟（1）中培養(yǎng)液，采用差速離心法收集外泌體，即得到載有Trail蛋白的外泌體；
步驟（3）：在步驟（2）獲得的載有Trail蛋白的外泌體中加1~8 mg/mL溶菌酶，置于20~37℃搖床中，80~200 rpm振蕩1~3 h，即可獲得；
步驟（4）：向外泌體中分別加入靶向黑色素瘤細(xì)胞的10~30 μg/mL多肽iRGD和10~30 μg/mL多肽PEP，置于20~37℃搖床中，80~200 rpm振蕩1~3 h；于4 ℃，離心，棄去上清，得到iRGD接枝的外膜囊泡和PEP多肽接枝的外膜囊泡；
步驟（5）：向步驟（1）得到的外膜囊泡中加入0.1-2mg/mL紅外光熱劑吲哚菁綠ICG，置于20~37℃搖床中，80~200 rpm振蕩1~3 h；
步驟（6）：離心收獲即得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的外泌體在制備治療皮膚淺表性黑色素瘤的藥物中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所制備得到的藥物的給藥方式為透皮給藥。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述步驟（4）和（6）中的離心的離心力為100000g~200000g。
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