[發明專利]改善胰島素抵抗的二肽EL及其用途

有效

• 申請號: 201810459368.2
• 申請日: 2018-05-15
• 公開（公告）號: CN108623655B
• 公開（公告）日: 2020-09-01
• 發明（設計）人: 朱作藝;王偉;張玉;李雪;王君虹
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C07K5/072
• 分類號: C07K5/072;A61K38/05;A61P5/50;A61P3/10
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

本發明公開了一種改善胰島素抵抗的二肽EL，該二肽EL的氨基酸序列為：Glu?Leu。本發明還同時公開了上述二肽EL在制備降血糖功能藥物中的應用；其能制備具有改善胰島素抵抗功能的降血糖藥物，即，制備可顯著促進胰島素抵抗的HepG2細胞對葡萄糖消耗以及糖原合成、改善胰島素抵抗、達到降血糖效果的藥物。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，特別涉及具有降血糖功能的二肽EL及其用途。

背景技術

糖尿病是一種嚴重危害人類健康的常見病和多發病。根據國際糖尿病聯盟(IDF)最新報告顯示，2017年全球糖尿病患者達4.25億，預計到2045年，糖尿病患者將達6.29億。我國是糖尿病患者人數最多的國家，患者數量達1.343億，患病率為10.9％。其中，2型糖尿病占糖尿病的90％-95％，目前其治療仍以藥物治療為主，主要有阿卡波糖、伏格列波糖、瑞格列奈、那格列奈、格列美脲、二甲雙胍、噻唑烷二酮類等,這些藥物雖能較好地控制血糖，但長期服用易產生耐藥性，伴隨許多不良反應和副作用，且無法有效改善胰島素抵抗。因此，探尋一種降血糖活性好，安全性高，并且能有效改善胰島素抵抗的的天然產物具有重要的意義。

胰島素抵抗是2型糖尿病的主要發病機制之一，改善胰島素抵抗是發展新型藥物治療2型糖尿病的重要戰略。目前已有大量研究報道從動植物中發現具有降血糖作用的天然產物，如多糖類物質、酚類化合物等植物提取物、動植物蛋白水解物等。生物活性肽是源于蛋白質的多功能化合物，在生命活動中起著重要的調節作用，它比原料蛋白具有更優異的理化特性、營養特性和生物學活性，食用安全性極高。已有研究報道從天然產物中發現具有降血糖作用的多肽類物質，如從大馬哈魚、苦瓜、靈芝、玉米、癩葡萄及蜂蛹蛋白水解物中均發現具有降血糖活性的多肽。現有報道的降血糖多肽大多為蛋白水解混合物，較少涉及具體單一多肽從改善胰島素抵抗途徑達到降血糖的效果。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種改善胰島素抵抗的二肽EL及其用途。

為了解決上述技術問題，本發明提供一種改善胰島素抵抗的二肽EL，該二肽EL的氨基酸序列為：Glu-Leu。

本發明還同時提供了上述二肽EL在制備降血糖藥物中的應用。

作為本發明的二肽EL的應用的改進：制備具有改善胰島素抵抗功能的降血糖藥物。即，制備可顯著促進胰島素抵抗的HepG2細胞對葡萄糖消耗以及糖原合成，改善胰島素抵抗，達到降血糖效果的藥物。

本發明的二肽EL可通過委托吉爾生化(上海)有限公司合成獲得。

本發明所設計的二肽是針對促進胰島素抵抗的HepG2細胞對葡萄糖的消耗，以及促進細胞內糖原的合成，從而表現出具有降血糖功能的特性。

本發明中所涉及的各項試驗方法具體如下：

1、HepG2細胞的培養

HepG2細胞復蘇后用含10％滅活胎牛血清的DMEM高糖(葡萄糖濃度為4500mg/L)培養液轉入細胞培養瓶中，37℃、5％CO₂條件下培養。當細胞貼壁長滿后，棄去培養液，用PBS溶液輕輕洗滌2次，用0.25％胰蛋白酶消化，每3天按1：3比例傳代1次，取對數生長期的細胞用于實驗。

2、胰島素抵抗HepG2細胞模型的建立

將處于對數生長期的HepG2細胞消化后，用含10％胎牛血清的DMEM高糖培養液調整為細胞密度為5×10⁴個/mL，接種于96孔培養板中，每孔100μL細胞懸液。待細胞單層貼壁后，更換含有胰島素濃度為5×10^-7mol/L的DMEM高糖培養液，于37℃、5％CO₂條件下培養箱中孵育24h，建立胰島素抵抗HepG2細胞模型。

3、葡萄糖消耗實驗