[發(fā)明專利]一種骨靶向性鮭魚降鈣素及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810457772.6
• 申請(qǐng)日: 2018-05-14
• 公開（公告）號(hào): CN108586601B
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李建樹;劉衍朋;俞鵬;謝婧;李安琦
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K14/585
• 分類號(hào): C07K14/585;C07K1/06
• 代理公司: 成都科海專利事務(wù)有限責(zé)任公司 51202
• 代理人: 郭萍

本發(fā)明提供了一種骨靶向性鮭魚降鈣素，是將鮭魚降鈣素分子中的二硫鍵打開并與骨靶向性偶聯(lián)分子共價(jià)偶聯(lián)形成，制備方法如下：(1)制備骨靶向性偶聯(lián)分子，(2)將鮭魚降鈣素溶解于pH值為5～7的水溶性溶劑中，加入還原劑將鮭魚降鈣素的二硫鍵還原形成自由巰基，然后加入骨靶向性偶聯(lián)分子，在0～40℃攪拌反應(yīng)0.5～12h，將粗產(chǎn)物分離，采用制備型液相色譜純化，即得骨靶向性鮭魚降鈣素。本發(fā)明提供的骨靶向性鮭魚降鈣素不具有細(xì)胞毒性和免疫原性，能提高降鈣素的骨組織富集能力，可有效修復(fù)骨組織，具有廣闊的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種骨靶向性鮭魚降鈣素及其制備方法。

背景技術(shù)

鮭魚降鈣素(Salmon calcitonin，sCT)是一種含有32個(gè)氨基酸的單鏈多肽類激素，能夠調(diào)節(jié)血液中的鈣離子濃度，減少骨吸收，并有明確的止痛作用。隨著年齡的增長(zhǎng)，人自身臟器逐漸衰老，降鈣素和其他相關(guān)激素分泌的能力會(huì)大大降低，導(dǎo)致骨量減少，骨結(jié)構(gòu)紊亂，抑制骨吸收的能力下降，逐步發(fā)展成骨質(zhì)疏松癥。目前用于治療絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥的藥物多為降鈣素類蛋白質(zhì)及多肽藥物，而且需要長(zhǎng)期用藥。

在外源性給予降鈣素的治療過程中，由于降鈣素的半衰期非常短，會(huì)迅速從體內(nèi)清除致使藥效難以發(fā)揮到極致，導(dǎo)致其全身生物利用度較低。同時(shí)，由于人體骨骼僅占總體重的4％～5％，傳統(tǒng)的藥物遞送系統(tǒng)僅會(huì)將一小部分sCT輸送到骨骼部位達(dá)到治療效果。sCT雖然與破骨細(xì)胞上的降鈣素受體(CTR)相互作用而達(dá)到其抗吸收作用。但是CTR也廣泛分布在非骨骼組織中。研究發(fā)現(xiàn)，已經(jīng)證實(shí)可以與降鈣素高親和力結(jié)合的組織有：腎臟，腦，肺部，胎盤，卵巢，睪丸和精子等等。因此，如果全身施用藥物而不特異性地靶向骨組織，這樣的治療方案會(huì)使得sCT藥物在這些組織的CTR中存在競(jìng)爭(zhēng)，這會(huì)進(jìn)一步降低破骨細(xì)胞的sCT可利用性。采用骨靶向性分子可以改善sCT靶向、定位和骨保留，有望提高sCT的療效，同時(shí)降低含有CTR的非骨位點(diǎn)的藥物濃度。

通過對(duì)降鈣素進(jìn)行改性增加功能基團(tuán)是改善降鈣素骨靶向性的手段之一。現(xiàn)有技術(shù)大多采用對(duì)降鈣素氨基酸序列中的賴氨酸殘基進(jìn)行偶聯(lián)改性，但是由于可結(jié)合的位點(diǎn)較多，通常會(huì)得到混合物(參見M.W.Jones,etc.,Chemical Communications 35(35)(2009)5272-5274；D.Samanta,etc.,Biomacromolecules 9(10)(2008)2891-2897；K.H.Bhandari,etc.,International Journal of Pharmaceutics 394(1–2)(2010)26-34.)。通過乙酰化修飾鮭魚降鈣素(sCT)的Lys-11和Lys-18會(huì)導(dǎo)致生物效能的顯著降低，因此不能通過氨基進(jìn)行sCT衍生化(參見S.M.Ryan,etc.,Journal of Controlled Release 149(2)(2011)126-132；G.Andreotti,etc.,Journal of Biological Chemistry 281(34)(2006)24193-203.)。研究已經(jīng)證明Gln-14可以使轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶被衍生化而不喪失活性，然而該方法并不是一種通用方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種骨靶向性鮭魚降鈣素，以在不降低鮭魚降鈣素生物效能的基礎(chǔ)上有效提高其骨靶向性，同時(shí)為鮭魚降鈣素的骨靶向改性提供一種通用方法。

本發(fā)明提供的骨靶向性鮭魚降鈣素，是將鮭魚降鈣素分子中的二硫鍵打開并與骨靶向性偶聯(lián)分子共價(jià)偶聯(lián)形成，該骨靶向性鮭魚降鈣素的結(jié)構(gòu)式如式(Ⅰ)所示，

式(Ⅰ)中，R＝n為2～9中的整數(shù)。

本發(fā)明還提供了一種上述骨靶向性鮭魚降鈣素的制備方法，步驟如下：

(1)制備骨靶向性偶聯(lián)分子